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植物組織培養(yǎng)的原理是細胞性。也就是說每個植物細胞里都含有一整套遺傳物質(zhì),只不過在特定條件下不會表達。
組織培養(yǎng)基于此原理就可以將已處于分化終端或正在分化的植物組織脫分化,誘導(dǎo)形成愈傷組織,再在愈傷組織上形成新的叢生芽。
培養(yǎng)過程中
1.愈傷組織的培養(yǎng)條件:必須無菌操作
2.材料:剛生長不久,具有高度分裂能力的莖尖,芽尖,感染病毒的機會很小
3.植物細胞性,確保組織能培養(yǎng)成植株。
4.在無菌操作室中完成接種工作,然后放于培養(yǎng)室[光照(日光燈照射),溫度(30度)]中培養(yǎng)。所以說完成操作后,在培養(yǎng)室中培養(yǎng)時就需要光照條件了。
改良作物
增加遺傳變異性
單倍體育種:通過花藥培養(yǎng),從小孢子獲得單倍體植株,染色體加倍后獲得正常二倍體植株,這是一條育種的新途徑。單倍體育種可以縮短育種年限,節(jié)約人力物力,較快地獲得優(yōu)良品種,21世紀初已有四十多種植物獲得了單倍體植株。中國在水稻、小麥、煙草、柏樹、橡膠、辣椒等植物的單倍體育種的工作上,處于地位。
胚培養(yǎng)、子房培養(yǎng)、胚珠培養(yǎng):為了克服遠緣雜交的不親和性,可采用胚、子房、胚珠培養(yǎng)和試管受精等手段。早成功的例子是兩個栽培種亞麻的雜交胚發(fā)生敗育,利用za種胚培養(yǎng)克服了一些障礙,得到種子。在棉花、黃麻上獲得成功。從玉米的離體子房培養(yǎng),經(jīng)體外受粉可以得到種子。
突變體的選擇和應(yīng)用:由于植物的單細胞培養(yǎng)成功,可以用這個方法誘發(fā)單細胞進行突變,通過篩選所需要的突變體,然后使細胞分化成植株,再通過有性世代使遺傳性穩(wěn)定下來,這是從細胞水平來改造植物的一種途徑。除細胞外,愈傷組織、花藥、原生質(zhì)體都可誘發(fā)突變。70年代以來,世界各國在這方面已有不少成功的例子,如:已選育出抗花葉病毒的甘蔗無性系,抗1-2%NaCl的野生煙草細胞株,抗除草劑的白三葉草細胞株等。
體細胞雜交和遺傳工程:自1960年以來用酶法獲得大量有活力的植物原生質(zhì)體,現(xiàn)已從四十多種植物的原生質(zhì)體產(chǎn)生出再生植株。通過異種原生質(zhì)體的相互融合(即體細胞雜交)為植物育種工作開闊新的途徑。原生質(zhì)體融合的工作自1972年Carlson在兩個煙草種間成功以來,21世紀初除種內(nèi)與種間能獲得za種植株外,在屬間甚至不同科的植物間亦做了許多工作,如煙草與大豆、煙草與天仙子、矮牽牛與小花矮牽牛、番茄與矮牽牛等都得到了za種植株。
此外,通過原生質(zhì)體融合,并以選擇胞質(zhì)鏈霉素抗性做手段以轉(zhuǎn)移煙草的雄性不育性狀,或通過原生質(zhì)體融合轉(zhuǎn)移胞質(zhì)的抗林可霉素因子都得到成功。
原生質(zhì)體沒有細胞壁,容易接受外來的引入物質(zhì)。由于致癌農(nóng)桿菌可以使多種植物形成腫瘤,以及已發(fā)現(xiàn)它所帶的Ti質(zhì)??梢杂行У牟迦胫参锛毎幕蚪M中,所以一些研究者也設(shè)想能否以Ti質(zhì)粒作為載體,與固氮基因重組后轉(zhuǎn)入植物的細胞中,如能實現(xiàn)將固氮基因轉(zhuǎn)到非豆科植物如水稻、小麥、玉米等作物中,則遺傳工程在創(chuàng)新植物類型上的前景,無疑是非常廣闊的。
繁殖植物
組織培養(yǎng)中從一個單細胞,一塊愈傷組織,一個芽(或其它器官)都可以獲得無性系。無性系就是用植物體細胞繁殖所獲得的后代。用植物組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖的無性系可概括為五個類型:
原球莖:細胞或組織培養(yǎng)經(jīng)原球莖途徑分化成植株。大部分蘭花屬于這一類型,即蘭花的各個部分的離體組織都能誘導(dǎo)形成原球莖,再經(jīng)培養(yǎng)分化形成植株。
器官發(fā)生型:即從細胞或愈傷組織培養(yǎng)通過不定芽形成植株,如煙草愈傷組織培養(yǎng)分化所得的植株。
胚狀體發(fā)生型:從細胞或愈傷組織通過胚狀體途徑,即由球形期、yu雷期、心形期、子葉期經(jīng)成熟胚發(fā)育成植株,如胡蘿卜體細胞培養(yǎng)可通過胚狀體途徑形成植株。
器官型:從離體珠莖、花芽、葉、鱗片等,亦即從離體的母體組織直接產(chǎn)生小植株,如貝母、百合等。
無菌短枝扦插;選取已發(fā)育成熟的腋芽,連同短枝經(jīng)表面滅菌后在無菌條件下培養(yǎng),使其生根。腋芽可用生長激素處理促使其萌發(fā)。這一方法在較短時間內(nèi)即可獲得一個植株。對保存珍貴的優(yōu)良樹種或花卉品種是簡易而有效的方法。
通過組織培養(yǎng)可以做到快速繁殖。1年中從一個芽得到103-106個芽,達到快速目的。無性繁殖。國外在草莓、蘋果、柑橘、蘭花、石竹、鐵線蓮、杜鵑、月季、桉樹等進行快速繁殖已達到商品化。中國已獲成功的有甘蔗、月季、菊花、無籽西瓜、櫟樹、山楂、獼猴桃、雪松等。
通過組織培養(yǎng)可以進行無病毒植株的培育。病毒是植物的嚴重病害,病毒病的種類不下五百多種。受害的糧食作物有水稻、小麥、馬鈴薯、甘薯,蔬菜作物有:油菜、大蒜,果樹有:柑橘、蘋果、棗,花卉有:唐菖蒲、石竹、蘭花等。防治無方,只好拔除病株,因而造成很大經(jīng)濟損失。病毒在植株上的分布是不均一的,老葉、老的組織和器官病毒含量高,幼嫩的未成熟組織和器官病毒含量較低,生長點幾乎不含病毒或病毒較少。
1952年法國Morel用生長點培養(yǎng)法獲得無病毒植株成功,以后許多國家開展了這方面的工作。已在馬鈴薯、甘薯、大蒜、石竹、百合、蘭花、草莓等植物上得到成功。如果采用0.1毫米以下的生長點,則培養(yǎng)時間長(1-1.5年),成活率低,無病毒苗。在我國已獲得馬鈴薯無病毒苗,并進行了推廣種植,在廣東省進行了柑橘無病毒苗的培育。
有用化合物
組織培養(yǎng)除了在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用外,21世紀初世界各國都在重視另一個方面,即有用化合物的工業(yè)化生產(chǎn)。有用化合物包括藥物、橡膠、香精油、色素等。這些化合物許多都是高等植物的次生代謝物,有些化合物還不能大規(guī)模地人工合成,而靠植物產(chǎn)生這些化合物來源有限。因此,利用組織培養(yǎng)方法,培養(yǎng)植物的某些器官或愈傷組織,并篩選出高產(chǎn)、高合成能力、生長快的細胞株系,以進行工業(yè)化生產(chǎn),是一條行之有效的途徑。
次生代謝物的研究和組織培養(yǎng)方面,進行工作多的是聯(lián)邦德國和日本。用組織培養(yǎng)可以生產(chǎn)的化合物有強心苷、吲哚生物堿、黃連素、輔酶Q10等,現(xiàn)已選出高產(chǎn)的細胞系,大規(guī)模生產(chǎn)亦有成效。人參為我國名貴藥材,現(xiàn)今因野生資源缺少,多用人工栽培,但人參生長慢,6年才有10克左右的人參根(干重),采用組織培養(yǎng)方法可比天然生長速度提高上百倍左右。我國科學家羅士韋早在1963年就成功地培育了人參的組織,但此工作后被迫中斷。21世紀初南京藥學院丁家宜利用組織培養(yǎng)生產(chǎn)出人參干粉。在組織培養(yǎng)中生長速度為0.5克o升-1o日-1(干重),比栽培人參0.004.5克o日-1o根-1約高100倍以上,并可在20天左右周期內(nèi)有10-20升大瓶中進行小批量生產(chǎn),每升得13.9克,其藥用成分和藥理活性與商品人參相似或更優(yōu),現(xiàn)已投入中試生產(chǎn)。這是我國個用組織培養(yǎng)進行藥的工業(yè)化生產(chǎn)的例子
在這方面尚待解決的問題是:
(1)選出的細胞系中次生物質(zhì)的產(chǎn)量是否高于起源植物;
(2)繼代培養(yǎng)后生物合成能力是否能保持;
(3)生長是否快速;(4)成材一核算問題。
(4)培養(yǎng)物質(zhì)溫貯藏和種質(zhì)庫的建立
在液氮(-196℃)條件下,加入冷凍保護劑,可使組織培養(yǎng)物的代謝水平降低,有利于細胞、胚狀體、試管苗、愈傷組織等的長期保存。據(jù)報導(dǎo),冷凍保存的胡蘿卜胚狀體,在保存1年后仍有再生成植株的能力,有些國家已利用此方法建立了種質(zhì)庫,但我國在這方面仍是空白。
在上一個新的動向是"人工種子"的試驗。所謂"人工種子",是指以胚狀體為材料,經(jīng)過人工薄膜包裝的種子。在適宜條件下它萌發(fā)長成幼苗。據(jù)美國遺傳公司報道,美國科學家已成功地把芹菜,苜蓿,花椰菜的胚狀體包裝成人工種子,并得到較高的萌發(fā)率,這些人工種子已生產(chǎn)并投放市場。我國科學工作者成功地研制成水稻人工種子??梢?,組織培養(yǎng)將在遺傳育種、作物改良和改革作物栽培中獲得更大的成效。
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