微滴式數(shù)字PCR技術(shù)應(yīng)用 食品中致病菌檢測最新標(biāo)準(zhǔn)匯總
【化工儀器網(wǎng) 標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布】食品安全問題不僅損害消費(fèi)者的權(quán)益，還會危害消費(fèi)者的健康。被細(xì)菌、病毒、寄生蟲獲化學(xué)物質(zhì)污染的食物進(jìn)入人體后可能會引發(fā)食源性疾病，導(dǎo)致急性中毒、傳染病感染或者癌癥等長期疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計，每年全世界有6億人(幾乎每10人中就有1人)因食用受污染的食品而患病，并有42萬人死亡。食源性疾病也是我國最大的食品安全問題，除了給醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)帶來壓力之外，還可能造成較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
細(xì)菌、病毒等微生物因素是食源性疾病主要致病因素之一，因此微生物檢測是預(yù)防控制食源性疾病，保障食品安全的關(guān)鍵因素。針對食品微生物檢測，我國制訂了一系列食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)以及有關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等，如GB 4789.2-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》、SN/T 0330-2012《出口食品微生物學(xué)檢驗通則》。近期，又有一批新的食品微生物檢測標(biāo)準(zhǔn)實施，均為出口食品中致病菌檢測方法，采用的檢測方法也均為微滴式數(shù)字PCR法。
微滴式數(shù)字PCR技術(shù)是近年來在分子生物學(xué)領(lǐng)域獲得廣泛應(yīng)用的新型數(shù)字PCR技術(shù)，具有度靈敏高、絕對定量及高效方便等特點，目前主要應(yīng)用于微生物檢測、轉(zhuǎn)基因檢測、疾病檢測以及質(zhì)檢領(lǐng)域。
微滴式數(shù)字PCR技術(shù)在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前將一個大的反應(yīng)體系進(jìn)行微滴化處理，即利用油包水技術(shù)將其分為數(shù)萬個納升級的微滴，可以有效避免反應(yīng)過程中不同引物間、產(chǎn)物間的相互雜交和不同產(chǎn)物之間的競爭抑制，獲得較好的擴(kuò)增效率，也可實現(xiàn)不同模板的同時擴(kuò)增。與傳統(tǒng)PCR、定量PCR相比，其結(jié)果的精確度、準(zhǔn)確性和靈敏度更佳。
于6月1日正式實施的8項出口食品中致病菌檢測方法行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)共同組成了SN/T 5364-2021《出口食品中致病菌檢測方法 微滴式數(shù)字PCR法》系列標(biāo)準(zhǔn)，分別為副溶血性弧菌、霍亂弧菌、溶藻弧菌、創(chuàng)傷弧菌、金黃色葡萄球菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌和克羅諾桿菌屬(阪崎腸桿菌)的檢測提供了規(guī)范的微滴式數(shù)字PCR檢測法。該方法主要用到的設(shè)備及耗材包括天平、恒溫培養(yǎng)箱、高速臺式冷凍離心機(jī)、渦旋振蕩儀、核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計、ddPCR擴(kuò)增儀及相關(guān)配套設(shè)備等。
標(biāo)準(zhǔn)的制定推廣了微滴式數(shù)字PCR技術(shù)的應(yīng)用，同時也為出口食品的致病菌檢測提供了一種更快速有效的方法，為我國食品和農(nóng)產(chǎn)品的國際貿(mào)易提供技術(shù)保障。
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