藥品質(zhì)量檢測(cè)方法：薄層色譜法
【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】薄層色譜法是一種以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的層析分離技術(shù)，能夠快速分離諸如脂肪酸、類固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)，因此自50年代發(fā)展起來之后，一直被應(yīng)用在生物研究、藥物研究、環(huán)境化學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。
從技術(shù)本身優(yōu)勢(shì)來說，薄層色譜法對(duì)被分離物質(zhì)的性質(zhì)沒有限制，因此使用范圍較廣。并且平面薄層具有多路柱效應(yīng)，因此理論上可以進(jìn)行多個(gè)樣品的分離。與此同時(shí)，得力于現(xiàn)代技術(shù)以及相關(guān)儀器的進(jìn)步，在儀器化、自動(dòng)化的今天，薄層色譜的分辨率及重現(xiàn)性也得到了了顯著提升。
準(zhǔn)備工作
薄層色譜法需要要準(zhǔn)備薄層板(按支持物的材質(zhì)分為玻璃板、塑料板或鋁板等；按固定相種類分為硅膠薄層板、鍵合硅膠板、微晶纖維素薄層板、聚酰胺薄層板、氧化鋁薄層板等；按固定相粒徑大小分為10~40µm普通薄層板和5~10µm高效薄層板)、點(diǎn)樣器(一般釆用微升毛細(xì)管或手動(dòng)、半自動(dòng)、全自動(dòng)點(diǎn)樣器材)、展開容器(上行展開一般用適合薄層板大小的專用平底或雙槽展開缸，展開時(shí)須能密閉；水平展開用專用的水平展開槽)、顯色裝置、檢視裝置。
薄層板制備
需要注意的是，市售薄層板與自制薄層板的準(zhǔn)備工作并不相同。市售薄層板臨用前一般應(yīng)在 110℃ 活化 30 分鐘(聚酰胺薄膜不需活化)。如在存放期間被空氣中雜質(zhì)污染，使用前可以用三氯甲烷、甲醇或二者的混合溶劑在展開缸中上行展開預(yù)洗、晾干后，再進(jìn)行活化，并置干燥器中備用。其中，鋁基片薄層板、塑料薄層板可根據(jù)需要剪裁，但須注意剪裁后的薄層板底邊的固定相層不得有破損。
而自制薄層板操作就較為復(fù)雜了。除另有規(guī)定外，首先將 1 份固定相和 3 份水(或加有黏合劑的水溶液，如 0.2%~0.5%羥甲基纖維素鈉水溶液，或?yàn)橐?guī)定濃度的改性劑溶液)在研缽中按同一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中。然后，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布(厚度為 0.2~0.3mm)，完成后取下涂好薄層的玻板，置水平臺(tái)上于室溫下晾干后，在 110℃ 烘 30 分鐘，隨即置于有干燥劑的干燥箱中備用。需要注意的是，自制薄層板使用前需檢查其均勻度，方法是在反射光及透視光下檢視，確保表面應(yīng)均勻、平整、光滑，并且無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染。
點(diǎn)樣與展開
點(diǎn)樣無特殊規(guī)定需在潔凈干燥的環(huán)境中進(jìn)行，用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上。一般為圓點(diǎn)狀或窄細(xì)的條帶狀，點(diǎn)樣基線距底邊 10~15mm，高效板一般基線離底邊 8~10mm。圓點(diǎn)狀直徑一般不大于 4mm，高效板一般不大于 2mm。接觸點(diǎn)樣時(shí)注意勿損傷薄層表面。條帶狀寬度一般為 5~10mm，高效板條帶寬度一般為 4~8mm，可用專用半自動(dòng)或自動(dòng)點(diǎn)樣器械噴霧法點(diǎn)樣。點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以相鄰斑點(diǎn)互不干擾為宜，一般不少于 8mm，高效板供試品間隔不少于 5mm。
之后將點(diǎn)好供試品的薄層板放入展開缸中，浸入展開劑的深度為距原點(diǎn) 5mm 為宜，密閉保存，待溶劑前沿達(dá)到規(guī)定的展距，取出薄層板并晾干。需要注意的是，展開前如需要溶劑蒸氣預(yù)平衡，可在展開缸中加入適量的展開劑后密閉，一般保持 15~30 分鐘即可。當(dāng)溶劑蒸氣預(yù)平衡后，應(yīng)迅速放入載有供試品的薄層板并立即密閉。如需使展開缸達(dá)到溶劑蒸氣飽和的狀態(tài)，則須在展開缸的內(nèi)壁貼與展開缸高、寬同樣大小的濾紙，一端浸入展開劑中，密閉一定時(shí)間，使溶劑蒸氣達(dá)到飽和再如法展開。
顯色與檢視
一般情況下，有顏色的物質(zhì)可以再在可見光環(huán)境下直接檢視，無色物質(zhì)則需先進(jìn)行顯色。顯色依據(jù)物質(zhì)不同采取的方法也不同，一般采用噴霧法或浸漬法佐以顯色劑或者直接通過加熱顯色來實(shí)現(xiàn)。另外，如果物質(zhì)帶有熒光或顯色后可激發(fā)產(chǎn)生熒光，可以借助紫外光燈(365nm 或 254nm)來完成熒光斑點(diǎn)觀察的工作，對(duì)于在紫外光下有吸收的成分，可用帶有熒光劑的薄層板(如硅膠 GF254 板)，在紫外光燈(254nm)下觀察熒光板面上的熒光物質(zhì)淬滅形成的斑點(diǎn)。
系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
按各品種項(xiàng)下要求對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，即用供試品和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)符合規(guī)定的要求。
鑒別
鑒別的過程一般通過對(duì)比供試品色譜圖中所顯斑點(diǎn)的位置和顏色(或熒光)與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖的斑點(diǎn)一致性來實(shí)現(xiàn)，必要時(shí)化學(xué)藥品可采用供試品溶液與標(biāo)準(zhǔn)溶液混合點(diǎn)樣、展開，與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相應(yīng)斑點(diǎn)應(yīng)為單一、緊密斑點(diǎn)。除此之外，還可以通過薄層色譜掃描儀進(jìn)行掃描來實(shí)現(xiàn)鑒別、檢查或含量測(cè)定的工作。具體來說即用一定波長的光照射在薄層板上，對(duì)薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，然后將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于鑒別、檢查或含量測(cè)定。
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