藥品質(zhì)量檢測方法之分子排阻色譜法
【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】近年來，各類生物制劑和創(chuàng)新藥蓬勃，醫(yī)藥行業(yè)進(jìn)入上升期。藥品的安全性和有效性一直是行業(yè)專家及患者關(guān)注的焦點(diǎn)。如何保障藥品安全性和有效性高度達(dá)標(biāo)的藥品是醫(yī)藥行業(yè)的核心和公關(guān)難點(diǎn)?；诖耍訌?qiáng)藥物研發(fā)項(xiàng)目的質(zhì)量管理，完善藥品檢測技術(shù)方法是保證藥品安全性和有效性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
2020版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱《藥典》)四部收載了通用技術(shù)要求、藥用輔料和藥包材標(biāo)準(zhǔn)。其中，技術(shù)要求部分對藥品檢測方法對了詳細(xì)說明。其中，分子排阻色譜法作為藥品分析方法的重要方法，其靈敏度、專屬性、準(zhǔn)確性均較高。
分子排阻色譜法是根據(jù)待測組分的分子大小進(jìn)行分離的一種液相色譜技術(shù)。分子排阻色譜法的分離原理為凝膠色譜柱的分子篩機(jī)制。色譜柱多以親水硅膠、凝膠或經(jīng)過修飾的凝膠如葡聚糖凝膠和瓊脂糖凝膠等為填充劑。填充劑表面分布著不同孔徑尺寸的孔，藥物分子進(jìn)入色譜柱后，它們中的不同組分按其分子大小進(jìn)入相應(yīng)的孔內(nèi)，大于所有孔徑的分子不能進(jìn)入填充劑顆粒內(nèi)部，在色譜過程中不被保留，最早被流動相洗脫至柱外，表現(xiàn)為保留時間較短；小于所有孔徑的分子能自由進(jìn)入填充劑表面的所有孔徑，在色譜柱中滯留時間較長，表現(xiàn)為保留時間較長；其余分子則按分子大小依次被洗脫。
《藥典》分子排阻色譜法部分還包括對儀器的一般要求以及該種方法檢測的相關(guān)流程事項(xiàng)。
對儀器的一般要求：
在藥物分析中，尤其是分子量或分子量分布測定中，通常采用高效分子排阻色譜法。分子排阻色譜法所需的進(jìn)樣器和檢測器同高效液相色譜法(《藥典》通則 0512)，液相色譜泵一般分常壓、中壓和高壓泵。
該種方法選用與供試品分子大小相適應(yīng)的色譜柱填充劑。使用的流動相通常為水溶液或緩沖溶液，溶液的 pH 值不宜超出填充劑的耐受力，一般 pH 值在 2~8 范圍。流動相中可加入適量的有機(jī)溶劑，但不宜過濃，一般不應(yīng)超過 30%，流速不宜過快，一般為0.5~1.0ml/min。
檢測流程及方法提要：
1.系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：分子排阻色譜法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中色譜柱的理論板數(shù)(n)、分離度、重復(fù)性、拖尾因子的測定方法。
在一般情況下，同高效液相色譜法(《藥典》通則 0512)項(xiàng)下方法，但在高分子雜質(zhì)檢查時，某些藥物分子的單體與其二聚體不能達(dá)到基線分離時，其分離度的計(jì)算公式為：
2測定法：主要包括分子量測定法、生物大分子聚合物分子量與分子量分布的測定法、高分子雜質(zhì)測定法。
(1)子量測定法一般適用于蛋白質(zhì)和多肽的分子量測定。按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法，選用與供試品分子大小相適宜的色譜柱和適宜分子量范圍的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
(2)生物大分子聚合物分子量與分子量分布方法測定時，選用與供試品分子結(jié)構(gòu)與性質(zhì)相同或相似的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)十分重要。此外，由于生物大分子聚合物如多糖、多聚核苷酸和膠原蛋白等具有分子大小不均一的特點(diǎn)，故生物大分子聚合物分子量與分子量分布是控制該類產(chǎn)品的關(guān)鍵指標(biāo)。
(3)高分子雜質(zhì)測定法主要用于檢測高分子聚合物或高分子物質(zhì)，并按各品種項(xiàng)下規(guī)定的色譜條件進(jìn)行分離。由于高分子雜質(zhì)系指供試品中含有分子量大于藥物分子的雜質(zhì)，該種物質(zhì)通常是在藥物生產(chǎn)或貯存過程中產(chǎn)生的高分子聚合物或在生產(chǎn)過程中未除盡的可能產(chǎn)生過敏反應(yīng)的高分子物質(zhì)。
3.定量方法：主要包括主成分自身對照法 、面積歸一化法、限量法、自身對照外標(biāo)法四種。成分自身對照法 、面積歸一化法均同高效液相色譜法(《藥典》通則 0512)項(xiàng)下規(guī)定。
其中，成分自身對照法一般用于高分子雜質(zhì)含量較低的品種。限量法一般用于混合物中高分子物質(zhì)的控制。值得注意的是，限量法除另有規(guī)定外，不得檢岀保留時間小于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)保留時間的組分。自身對照外標(biāo)法一般用于 Sephadex G-10 凝膠色譜系統(tǒng)中 β-內(nèi)酰胺抗生素中高分子雜質(zhì)的檢查。
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