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藥品質(zhì)量檢測方法：柱色譜法
2022年08月24日 15:24:14
來源：化工儀器網(wǎng) 作者：小王 點擊量：5181
柱色譜法是在一根玻璃管或金屬管中迸行的色譜技術(shù)，用來分離大多數(shù)有機(jī)化合物，尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。柱色譜法分離容量能從幾毫克到百毫克級，所以，適用于分離和精制較大量的樣品。而柱色譜法細(xì)分又可以分成吸附柱色譜和分配柱色譜兩種。
【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】柱色譜法是在一根玻璃管或金屬管中迸行的色譜技術(shù)，用來分離大多數(shù)有機(jī)化合物，尤其適合于復(fù)雜的天然產(chǎn)物的分離。柱色譜法分離容量能從幾毫克到百毫克級，所以，適用于分離和精制較大量的樣品。而柱色譜法細(xì)分又可以分成吸附柱色譜和分配柱色譜兩種。
吸附柱色譜的色譜柱為內(nèi)徑均勻、下端(帶或不帶活塞)縮口的硬質(zhì)玻璃管，端口或活塞上部鋪墊適量棉花或玻璃纖維，管內(nèi)裝入顆粒應(yīng)盡可能大小均勻的吸附劑(顆粒直徑若沒有特殊規(guī)定，一般采用 0.07~0.15mm)。色譜柱的大小，吸附劑的品種和用量，以及洗脫時的流速，均按各品種項下的規(guī)定進(jìn)行選擇。
在吸附柱色譜中，吸附劑是固定相，洗脫劑是流動相，基于各組分與吸附劑間存在的吸附強(qiáng)弱差異，通過使之在柱色譜上反復(fù)進(jìn)行吸附、解吸、再吸附、再解吸的過程，完成分離。因此，吸附柱色譜吸附劑的填充是一個非常重要的環(huán)節(jié)。
一般來說，吸附劑的填裝分為干法和濕法兩種。干法是將吸附劑一次加入色譜柱，振動管壁使其均勻下沉，然后沿管壁緩緩加入洗脫劑。若色譜柱本身不帶活塞，可在色譜柱下端出口處連接活塞，加入適量的洗脫劑，旋開活塞使洗脫劑緩緩滴出，然后自管頂緩緩加入吸附劑，使其均勻地潤濕下沉，在管內(nèi)形成松緊適度的吸附層。操作過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。
濕法是先將吸附劑與洗脫劑混合，攪拌除去空氣泡后，再徐徐傾入色譜柱中，然后加入洗脫劑將附著在管壁的吸附劑洗下，使色譜柱面平整。俟填裝吸附劑所用洗脫劑從色譜柱自然流下，至液面和柱表面相平時，即加供試品溶液。
加入供試品時也需要注意，除另有規(guī)定外，應(yīng)先將供試品溶于開始洗脫時使用的洗脫劑中，再沿管壁緩緩加入，并且不能使吸附劑翻起。也可將供試品溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲信c少量吸附劑混勻，再使溶劑揮發(fā)去盡使呈松散狀，加在已制備好的色譜柱上面。如供試品在常用溶劑中不溶，可將供試品與適量的吸附劑在乳缽中研磨混勻后加入。
洗脫同樣不能馬虎。除另有規(guī)定外，通常按洗脫劑洗脫能力大小遞增變換洗脫劑的品種和比例，分部收集流出液，至流出液中所含成分顯著減少或不再含有時，再改變洗脫劑的品種和比例。操作過程中應(yīng)保持有充分的洗脫劑留在吸附層的上面。
分配柱色譜的操作方法與吸附柱色譜基本一致。不顧偶需要注意的是，裝柱前，應(yīng)先將固定液溶于適當(dāng)溶劑中，加入適宜載體，混合均勻，待溶劑完全揮干后分次移入色譜柱中并用帶有平面的玻棒壓緊。供試品可溶于固定液，混以少量載體，加在預(yù)制好的色譜柱上端。洗脫劑需先加固定液混合使之飽和，以避免洗脫過程中固定液的流失。
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