該試劑盒以HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性SP 抗原人抗流行性出血熱病毒抗體IgG （EHF）免疫組化試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準確、背景清晰。在所用的SP 一抗與相應(yīng)靶抗原
結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合，zui后加入HRP-SA，形成抗原—特異
一抗—生物素化二抗—HR P-SA 復(fù)合物，顯微鏡下觀察成像。
原理及主要步驟

DAB

‖

HRP-SA

‖

Biotin-lgG

‖

Primary Ab

‖

Ag

人抗流行性出血熱病毒抗體IgG （EHF）免疫組化試劑盒所含試劑：
試劑A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（選用）
試劑B 封閉緩沖液（封閉用） 20 mL
試劑C （*分裝）已稀釋的即用型SP 一抗（2.5ml）
試劑D （*分裝）生物素化羊抗兔IgG 1 支
（濃度1.5 mg/mL，稀釋比為1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液20ml
試劑E HRP-SA 復(fù)合物1 支（濃度1 μM，稀釋比1:50~1:200）100 μL
試劑F DAB 顯色液 5ml
用戶自備試劑：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三羥基氨基甲烷1.21g
氯化鈉7.6g

加蒸餾水800mL，濃鹽酸調(diào)pH 值至7.2~7.4，zui后定容至1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比）
2．抗原修復(fù)液（依檢測抗原不同而選擇不同的修復(fù)液）
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液
檸檬酸0.38g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾水900mL，濃鹽酸調(diào)pH 值至6.0，zui后定容至1000mL
或：0.5M EDTA 修復(fù)液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
檸檬酸三鈉2.45g
加蒸餾水700mL，用10mM NaOH 調(diào)pH 值至8.0，zui后定容至1000Ml
3. 緩沖甘油封固劑10 mL
4. Tween 20 5 mL
石

實驗步驟（建議方案）：
石蠟包埋組織切片3~4μm 厚度
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于60℃恒溫烤箱中至少烤1 hr；
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min；
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無水乙醇5min，95%乙醇2 次（每次2min），85%
乙醇2 min；75%乙醇2min，自來水沖洗，ddH2O 洗2×2min；
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說明書*方法進行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達到98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來水沖洗，ddH2O 洗2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進入第5 步封閉。
5.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育30 min；
6.加一抗：滴加用試劑C（即用型一抗），37℃濕盒孵育2 hr 或4℃過夜；
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
8.封閉： 滴加試劑B，37℃濕盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑D），37℃濕盒中孵育
30 min；
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）；
11.封閉： 滴加試劑Tween 20，37℃濕盒孵育封閉20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑E（1：50~200，終濃度5~20 nM），
37℃濕盒中孵育30 min；
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）；
14.顯色：應(yīng)用DAB 溶液（試劑F）顯色；
15.復(fù)染：自來水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明；

16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片；
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。
注意事項：
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致
結(jié)晶或抗原封閉。
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
用。
3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。
4. 封片前一定要換用TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的Tween 20，否則會
影響結(jié)果觀察。
5. 如須復(fù)染細胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進行封
片。
附1：
抗原修復(fù)方法
常用抗原修復(fù)液：檸檬酸緩沖液（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修復(fù)液（pH8.0 或

9.0）等等。
一、酶消化修復(fù)法
切片脫蠟水化處理，TBS 沖洗，在組織上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育
20~30min 后TBS 沖洗即可。
二、微波抗原修復(fù)法
微波盒中加入抗原修復(fù)液微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的切片置于耐高溫塑料
切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔或高檔繼續(xù)微波10~15min，取出微波
盒冷卻至室溫后，自來水沖洗，取出切片。因不同微波爐微波處理時間存在差異，
須自行調(diào)整。
三、直接高壓抗原修復(fù)法
取修復(fù)液于不銹鋼高壓鍋中加熱至沸騰，將組織切片置于耐高溫切片架上，修復(fù)
液沸騰后放入切片架，蓋上鍋蓋，待噴氣后計時1.5~2.5min 即可脫離熱源，自
然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用于較難檢測或核抗原的修復(fù)。
四、隔水式高壓抗原修復(fù)法
不銹鋼高壓鍋中加自來水加熱至沸騰，微波盒中加入修復(fù)液于微波爐中加熱至沸
騰，將切片放入微波盒中，再將微波盒放入高壓鍋中蓋上鍋蓋，待噴氣后計時4~8 min 即可關(guān)閉熱源，自然冷卻至室溫后自來水沖洗，取出切片。此方法適用
于較難檢測或核抗原的修復(fù)。

人抗流行性出血熱病毒抗體IgG （EHF）免疫組化試劑盒,其它相關(guān)產(chǎn)品

 胰凝乳蛋白酶（牛）/α-糜蛋白酶/α-胰凝乳蛋白酶/凝胰朊酶/凝胰蛋白酶/Chymotrypsin（bovine）/ α-Chymotrypsin（bovine） USP級，1500USP u/mg 1克 200 CAS:9004-07-3 保存：-20℃
10克 1800
α-淀粉酶（枯草桿菌）/中溫淀粉酶/液化型淀粉酶/液化酶/α-1,4糊精酶/細菌性淀粉酶/α-淀粉酵素/糊精化酶 BR，4000u/g 250克 100 9000-90-2 2～8°C
生物技術(shù)級，50u/mg 1克 400
高峰α-淀粉酶/高峰淀粉酶/高溫淀粉酶/耐熱α-淀粉酶/淀粉糖化酶/他卡淀粉酶糖化素/α-Amylase from Aspergillus oryzae BR，4000u/g 250克 150 9001-19-8 2～8°C
生物技術(shù)級，30u/mg 10克 700
β-淀粉酶/1,4-α-D-葡聚糖麥芽水解酶/糖原酶/糖化淀粉酶/β-Amylase 生物技術(shù)級，17u/mg 25克 700 9000-91-3 2～8°C
BR，50u/mg 25克 220
果膠酶/粘膠質(zhì)酶/果膠甲脂酶/聚半乳糖醛酸酶/Pectinase BR，500u/mg 25克 70 9032-75-1 2～8°C
100克 200
1公斤 900
生物技術(shù)級，1u/mg 10克 600
果膠酶Y-23/Pectolyase Y-23 BR，99% 100毫克 100 9032-75-1 2～8°C
1克 700
菠蘿蛋白酶/菠蘿酶/風(fēng)梨酶/菠蘿朊酶/Bromelaine BR，300u/mg 25克 70 37189-34-7 RT
100克 220 或9001-00-7
1公斤 1000
生物技術(shù)級，600u/mg 25克 200
100克 600
1公斤 2000
木瓜蛋白酶/番木瓜酶/木瓜朊酶/番瓜酵素/木瓜酶/Papain BR，800u/mg 25克 50 9001-73-4 RT
100克 150
1公斤 1000
生物技術(shù)級，6000u/mg 100克 600 2～8°C
酸性蛋白酶/Acidic Protease BR，50u/mg 250克 150 9025-49-4 2～8°C
中性蛋白酶/分散酶/Neutral protease/Dispase BR，50u/mg 250克 150 9068-59-1 2～8°C
鏈霉蛋白酶/鏈絲菌蛋白酶/鏈霉菌蛋白酶/Pronase E BR，4000u/mg 250毫克 400 9036-06-0 保存：-20℃
抗蛋白酶/抗痛素二鹽酸鹽/Antipain dihydrochloride 超純 5毫克 800 37682-72-7 2～8℃
膽固醇酯酶（豬胰）/膽甾醇酯酶（豬胰）/Cholesterol esterase 生物技術(shù)級，300u/mg 100u 680 9026-00-0 保存：-20℃
糖化酶/糖化淀粉酶/淀粉葡萄糖苷酶/葡萄糖淀粉酶/γ-淀粉酶/α-1,4-葡萄糖水解酶/淀粉脫脂酶/Amyloglucosidase from aspergillus niger BR，10萬u/g 250克 100 9032-08-0 2～8℃
乙酰輔酶A/乙酰輔酶A鈉鹽/Acetyl CoA BR，93% 5毫克 700 102029-73-2 保存：-20℃
10毫克 1200
50毫克 4000
葡萄糖氧化酶/GOX/GOD/Glucose oxidase BR，100-250u/mg 10ku 120 9001-37-0 保存：-20℃
50ku 400
250ku 1400
D-α-氨基氧化酶/D-氨基酸氧化酶/D-AAO 生物技術(shù)級，0.5u/mg 100毫克 2600 9000-88-8 2～8°C
L-氨基酸氧化酶/L-AAO/TM-LAO/L-amino acid oxidase BR，類型IV，4u/mg 2毫克 1200 9000-89-9 保存：-20℃
5毫克 2400
BR，類型VI，0.2u/mg 100毫克 980
250毫克 1750
500毫克 2800
己糖激酶/己糖磷酸激酶/HK/Hexokinase from Saccharomyces cerevisiae BR，類型F-300，130u/mg 500u 560 9001-51-8 保存：-20℃
2500u 1960
BR，類型III，25u/mg 250毫克 1400
1克 4000
胃蛋白酶（豬胃粘膜）/胃液素/胃朊酶/蛋白酵素/酸腈酶/百布圣/Pepsin（porcine stomach mucose） USP級，1：30000 25克 150 9001-75-6 2～8℃
100克 500
500克 2000
1公斤 3500
高純，1：15000 25克 120
100克 350
1公斤 2500
高純，1：10000 25克 80
100克 200
1公斤 1500
USP級，1：3000 25克 40
100克 120
500克 500