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國(guó)產(chǎn)凝膠滲透色譜的相關(guān)知識(shí)普及,你一定要知道

來(lái)源:上海杜凱生物科技有限公司   2025年03月11日 06:06  
  國(guó)產(chǎn)凝膠滲透色譜利用高分子溶液通過(guò)填充有微孔凝膠的柱子進(jìn)行分離,依據(jù)分子大小進(jìn)行分離。在柱內(nèi),不同大小的高分子分子會(huì)以不同程度滲透到填料的微孔中。體積大于凝膠空隙的分子會(huì)被排阻,直接流出柱子,而小分子則可以滲入凝膠孔隙中,后流出柱子。中等大小的分子介于兩者之間。通過(guò)測(cè)量溶質(zhì)和溶劑之間的折射率差異、紫外吸收、光散射或粘度等參數(shù),得出分子的相關(guān)信息。
 
  廣泛應(yīng)用于聚合物、生物大分子和其他高分子化合物的分析和表征。它可以用來(lái)確定聚合物的平均分子量、分子量分布以及聚合度等參數(shù),從而評(píng)估聚合物的質(zhì)量和性能。此外,還可以用于監(jiān)測(cè)聚合反應(yīng)的進(jìn)程和控制聚合物的合成過(guò)程。
 
  國(guó)產(chǎn)凝膠滲透色譜(GPC)的測(cè)定步驟:
 
  1.樣品準(zhǔn)備:
 
  -選擇合適的溶劑:根據(jù)樣品的性質(zhì)選擇能夠溶解樣品的溶劑,且該溶劑應(yīng)與凝膠色譜柱兼容。例如,對(duì)于許多有機(jī)聚合物,常用的溶劑有四氫呋喃、甲苯、二甲基甲酰胺等;對(duì)于水溶性聚合物,則可選用純水或水溶液作為溶劑。
 
  -制備樣品溶液:將樣品溶解在選定的溶劑中,制成一定濃度的溶液。一般來(lái)說(shuō),樣品濃度要適中,過(guò)高的濃度可能導(dǎo)致色譜峰變寬甚至出現(xiàn)平頭峰,影響分離效果;過(guò)低的濃度則會(huì)降低檢測(cè)的靈敏度。通常聚合物樣品的濃度在0.1%-1%之間較為合適。
 
  -過(guò)濾樣品溶液:為了防止樣品中的雜質(zhì)堵塞色譜柱,需要使用濾膜對(duì)樣品溶液進(jìn)行過(guò)濾。對(duì)于有機(jī)相樣品,一般使用0.45μm的濾膜;對(duì)于水相樣品,使用0.22μm的濾膜。
 
  2.儀器準(zhǔn)備:
 
  -開(kāi)機(jī)預(yù)熱:打開(kāi)凝膠滲透色譜儀的電源開(kāi)關(guān),讓儀器預(yù)熱一段時(shí)間,一般需要30分鐘到1小時(shí)左右,使儀器達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。同時(shí),確保儀器的各個(gè)部件連接正常,如泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器等。
 
  -檢查流動(dòng)相:檢查流動(dòng)相是否充足,是否需要更換或補(bǔ)充。如果使用新的流動(dòng)相,需要先對(duì)其進(jìn)行脫氣處理,以去除其中的空氣,防止空氣進(jìn)入色譜柱影響分離效果。脫氣的方法可以采用超聲脫氣、真空脫氣或氦氣鼓泡等。
 
  -設(shè)置儀器參數(shù):根據(jù)樣品的特性和分析要求,設(shè)置合適的儀器參數(shù),如流速、柱溫、進(jìn)樣量等。流速一般控制在0.5-1.0mL/min之間,柱溫通常為室溫到150℃之間,進(jìn)樣量一般在10-100μL之間。
 
  3.上機(jī)測(cè)試:
 
  -清洗系統(tǒng):先用流動(dòng)相沖洗整個(gè)系統(tǒng),將系統(tǒng)中可能存在的雜質(zhì)沖洗干凈,直到基線平穩(wěn)為止。這一步通常需要10-30分鐘左右。
 
  -校準(zhǔn)儀器:使用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn),建立分子量與保留時(shí)間之間的校正曲線。常用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)有聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯等。將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制成不同濃度的溶液,分別注入色譜儀,記錄其保留時(shí)間和峰面積,然后通過(guò)軟件擬合得到校正曲線。
 
  -進(jìn)樣分析:將準(zhǔn)備好的樣品溶液通過(guò)進(jìn)樣器注入色譜儀,開(kāi)始進(jìn)行分離分析。樣品在色譜柱中會(huì)根據(jù)分子大小進(jìn)行分離,分子量大的先流出,分子量小的后流出,經(jīng)過(guò)檢測(cè)器時(shí)會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的信號(hào),從而得到色譜圖。
 
  4.數(shù)據(jù)分析:
 
  -分子量計(jì)算:根據(jù)校正曲線和樣品的保留時(shí)間,計(jì)算出樣品的分子量及其分布。常見(jiàn)的分子量有數(shù)均分子量、重均分子量、粘均分子量等。通過(guò)對(duì)分子量分布的分析,可以了解樣品中分子的大小分布情況,以及是否存在高分子量或低分子量的組分。
 
  -數(shù)據(jù)整理與報(bào)告:將分析得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理,繪制出分子量分布曲線,并撰寫(xiě)分析報(bào)告。報(bào)告中應(yīng)包括樣品的基本信息、實(shí)驗(yàn)條件、分析結(jié)果等內(nèi)容。
國(guó)產(chǎn)凝膠滲透色譜

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