化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標(biāo)物>行業(yè)專用試劑>生化與分子生物學(xué)用試劑>11202ES08 實時熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix)
11202ES08 實時熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix)
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 11202ES08
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2024/9/4 16:51:56
- 訪問次數(shù) 2914
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企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進化技術(shù)為驅(qū)動，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細(xì)胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)?；a(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細(xì)胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細(xì)胞分析系列、細(xì)胞培養(yǎng)系列、細(xì)胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊商標(biāo)權(quán)37項以及4項境外注冊商標(biāo)，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達(dá)工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細(xì)胞的技術(shù)開發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認(rèn)證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認(rèn)可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實驗室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻力量。
分子生物學(xué)試劑，細(xì)胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5 x 1mL |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11202ES08 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格（元） |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) 實時熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix) | 11202ES03 | 1 mL | -20℃避光 | 180.00 |
11202ES08 | 5×1 mL | -20℃避光 | 498.00 | |
11202ES50 | 50×1 mL | -20℃避光 | 7200.00 | |
11202ES60 | 100×1 mL | -20℃避光 | 12877.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix實時熒光定量qPCR預(yù)混液(SYBR Green Mix)(Low Rox Plus)是2×實時定量PCR擴增的預(yù)混合溶液。Mix中含有熱啟動Hieff® DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+及Low Rox。使用時，僅需在擴增體系中加入模板和引物即可進行實時熒光定量PCR，大大簡化操作過程，降低污染幾率。
本品采用的DNA聚合酶配體可以隨溫度變化實時調(diào)節(jié)DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特異性PCR擴增的因子和提升PCR反應(yīng)擴增效率的因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
適用機型
Applied Biosystems: 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio Dx, QuantStudio3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000.
運輸與保存方式
冰袋運輸。-20℃避光儲存，有效期18個月。
本品避免反復(fù)凍融。產(chǎn)品中含有熒光染料SYBR Green I，保存或配制反應(yīng)體系時需避免強光照射。
注意事項
1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號：11123ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
2. 解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀物質(zhì)，4℃放置并上下顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
4.本產(chǎn)品僅作科研用途！
反應(yīng)體系（推薦冰上配制）
組分 | 體積（μl） | 體積（μl） | 終濃度 |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
Reverse Primer (10μM) | 1 | 0.4 | 0.2μM |
模板DNA | X | X | - |
無菌超純水 | to 50 | to 20 | - |
【注】： 使用前務(wù)必充分混勻，避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2μM，也可以根據(jù)情況在0.1-1.0μM之間進行調(diào)整。
b) 模板濃度：如模板類型為未稀釋cDNA原液，使用體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10。
c) 模板稀釋：cDNA原液建議5-10倍稀釋，最佳模板加入量以擴增得到的CT值在20-30個循環(huán)為好。
d) 反應(yīng)體系：推薦使用20μl或50μl，以保證目的基因擴增的有效性和重復(fù)性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內(nèi)配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應(yīng)管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
擴增程序（兩步法） 擴增程序（三步法）
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | 循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | |
預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 | 預(yù)變性 | 95℃ | 5min | 1 | |
變性 | 95℃ | 10sec | 40 | 變性 | 95℃ | 10sec | 40 | |
退火/延伸 | 60℃ | 30sec★ | 退火 | 55-60℃ | 20sec | |||
延伸 | 72℃ | 20sec★ | ||||||
熔解曲線階段 | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | 熔解曲線階段 | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 | |||
【注】高特異性可選擇兩步法，高效率擴增可選擇三步法。
a) 預(yù)變性時間：根據(jù)不同模板和引物的具體情況可適當(dāng)縮短至2min。
b) 退火溫度和時間：請根據(jù)引物和目的基因的長度進行調(diào)整。
c) 熒光信號采集（★）：請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設(shè)置，幾種常見儀器的時間設(shè)定如下：
30sec以上：Applied Biosystems: StepOne, StepOne Plus, 7500 Fast；Roche Applied Science: LightCycler 480；Bio-Rad: CFX96
31sec以上：Applied Biosystems: 7300
34sec以上：Applied Biosystems: 7500
d) 熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
結(jié)果分析
定量實驗至少需要三個生物學(xué)重復(fù)。反應(yīng)結(jié)束后需要確認(rèn)擴增曲線及熔解曲線。
1) 擴增曲線：標(biāo)準(zhǔn)擴增曲線為S型。
Ct值落在20-30之間時，定量分析最準(zhǔn)確；
Ct值小于10，需要將稀釋模板后，重新進行實驗；
Ct值介于30-35之間時，需要提高模板濃度，或者增大反應(yīng)體系的體積，以提高擴增效率，保證結(jié)果分析的準(zhǔn)確性；
Ct值大于35時，檢測結(jié)果無法定量分析基因的表達(dá)量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲線：
熔解曲線單峰，表明反應(yīng)特異性好可以進行定量結(jié)果分析；若熔解曲線出現(xiàn)雙峰或者多峰，則不能進行定量分析。
熔解曲線出現(xiàn)雙峰，需要通過DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標(biāo)峰是引物二聚體還是非特異性擴增。
如果是引物二聚體，建議降低引物濃度，或者重新設(shè)計擴增效率高的引物。
如果是非特異性擴增，請?zhí)岣咄嘶饻囟?，或者重新設(shè)計更高特異性的引物。
引物設(shè)計指南
1. 推薦引物長度25bp左右。擴增產(chǎn)物長度150bp為佳，可以在100bp-300bp內(nèi)選擇。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3. 引物堿基分布要均勻，避免出現(xiàn)連續(xù)的4個相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。
4. 引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個堿基以上的互補序列。
5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物3’端有2個堿基以上的非特異性互補。
6. 設(shè)計完成的引物需要進行擴增效率的檢測，只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。
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產(chǎn)品名稱 | 貨號 | 規(guī)格 |
Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit HOT | 11119ES60 | 100T |
Hifair®II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (gDNA digester plus) | 11121ES60 | 100T |
Hifair® II 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) HOT | 11123ES60 | 100T |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (No Rox )HOT | 11201ES08 | 5ml |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (Low Rox Plus) HOT | 11202ES08 | 5ml |
Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix (High Rox Plus) HOT | 11203ES08 | 5ml |
HB210910
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