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原位雜交(DAB)

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原位雜交(DAB)

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關于我們

  上海信帆生物科技有限公司(Shanghai Xinfan Biotechnology Co.,Ltd)成立于上海,是一家集“產品研發(fā)、銷售、技術服務”為一體的生物公司。經(jīng)過多年的努力發(fā)展已成為專業(yè)供應各類生物科研用品的公司,長期專注于生物領域,旗下代理產品種類眾多。信帆生物秉承以產品質量為根本,以市場需求為導向,以為客戶創(chuàng)造價值為己任的精神,堅守產品質量的可靠、穩(wěn)定,并嚴格秉承專業(yè)、誠實、守信、創(chuàng)新全過程、多方位的質量監(jiān)控檢測,從包裝到品質,從產品到服務,每個環(huán)節(jié),我們都嚴控質量關,力求為客戶提供更好的、更專業(yè)性的技術服務和科研產品。我們供應的產品包括elisa試劑盒,生化試劑盒,動物血制品,抗體,質控品,干擾物質,抗原,生化試劑,實驗耗材等10萬余種類,公司長期致力于為客戶提供RT-PCR檢測、病理染色、免疫組化檢測、Western blotting檢測、生化檢測、ELISA檢測、放免檢測等一系列實驗代測服務。產品涉及分子生物學、細胞生物學、免疫學等生命科學的各個領域。


主營業(yè)務
   主營產品: 質控品,干擾物質,抗體抗原,elisa試劑盒,動物血制品,生化試劑盒等。實驗代做服務:HE
染色/特殊染色/技術服務、免疫組化實驗服務Western blotting實驗服務、RT-PCR實驗技術服務,QPCR(熒光定量PCR)、酶聯(lián)免疫ELISA、生化測試、液相氣相檢測、RACE、全基因合成、線粒體測序、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環(huán)境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務等。經(jīng)銷品牌:Abcam、SigmaCST、Amresco、BDEnzo、Bio-Radmerck、Santa CruzJackson、R&D、Merck Milliporegibco、hyclone、Bio-World、NEB、Tocris、Corning、Axygen等等。


核心價值

  公司本著以專業(yè)的產品、合理的價格、完善的服務,為客戶提供更好的,更專業(yè)的技術服務和科研產品。公司以質量為重,專業(yè)服務的原則,致力于為用戶提供高性價比的試劑盒和檢測服務,提供全程咨詢和技術支持,包括確定測定指標、選擇合適的試劑盒規(guī)格、試劑盒保存、預測定和測定結果分析等。高質量的產品,讓用戶省心;專業(yè)的檢測服務,讓用戶省力;優(yōu)惠的價格,讓用戶省錢。信帆生物為廣大用戶提供各類檢測服務,幫助老師輕松獲得了真實可靠的檢測數(shù)據(jù),顯著提高了用戶的科研效率,為其發(fā)表高水平的研究論文提供了堅實的平臺;為研究生按時畢業(yè),導師順利結題、申請新課題和晉升職稱提供了實實在在的幫助,公司客戶遍布國內各大學、醫(yī)院、研究所、衛(wèi)生防疫、生物公司等單位。






ELISA試劑盒,國產ELISA試劑盒,進口elisa試劑盒,食品檢測試劑盒,農殘試劑盒,化學培養(yǎng)基及生物標準品等

供貨周期 現(xiàn)貨

原位雜交(DAB)

服務介紹:

原位雜交原理:原位雜交是指將特定標記的已知序列核酸為探針與細胞或組織切片中核酸進行雜交,從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細胞標本或組織標本上進行。

名稱

規(guī)格

原位雜交(DAB)

 

實驗流程:

1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。

3、切片:石蠟經(jīng)切片機切片,攤片機撈片,62°烤箱烤片2h。

4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

5、消化:根據(jù)組織固定時間長短,切片于修復液中煮沸10-15分鐘,自然冷卻。后基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

6、阻斷內源性過氧化物酶:滴加3%甲醇-H2O2,室溫避光孵育15min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。

7、預雜交:滴加預雜交液,37°C孵育1h。

8、雜交:傾去預雜交液,滴加含探針雜交液, 恒溫箱 37度雜交過夜。

9、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。

10、滴加封閉液:滴加封閉血清正常兔血清。室溫30min。

11、滴加鼠抗地-高辛標記過氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min,后PBS洗4次×5min。

12、DAB顯色:切片稍甩干后,在圈內滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時間,陽性為棕黃色,純水沖洗切片終止顯色。

13、復染細胞核:Harris蘇木素復染3min左右,自來水洗,1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來水洗,氨水返藍,流水沖洗。

14、脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min—100%酒精I 6min—100%酒精II 6min-正丁醇6min—二甲苯透明,將切片從二甲苯中拿出稍晾干后,中性樹膠封片。

15、顯微鏡檢,圖像采集分析。

結果判讀:

陽性為棕黃色,細胞核為藍色。 

送樣要求:

1、切片前處理要求:新鮮組織干冰運輸后做冰凍切片;或取2mm左右厚度的新鮮組織,5min內投入原位雜交固定液內固定,4℃低溫保存運輸,切勿冷凍結冰,盡快包埋切片后進行原位雜交實驗,固定時間過長影響核酸檢出率;

2、冰凍切片:冰凍切片-20℃運輸;

3、石蠟切片:石蠟切片常溫運輸;

4、細胞爬片:細胞爬片加原位雜交固定液固定15min后,換無酶PBS,密封,4℃運輸。 

單據(jù)填寫:

1、探針合成:需提供待測目的基因序列或基因登錄號、所需標記類型;

2、自帶探針需告知完整探針信息;

3、寫明檢測要求。

 





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