細胞名稱  人永生化表皮細胞；HaCaT培養(yǎng)
形態(tài)特性 上皮細胞樣

品牌 貼壁生長

特征特性 該細胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關蛋白陽性。

培養(yǎng)條件 MEM-EBSS：

Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 15%FBS  

傳代方法 1:10～1:20傳代，每周換液2～3次

傳代情況 C2

凍存條件 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS

支原體檢測 培養(yǎng)法（-）　

STR Amelogenin：X；CSF1PO：9，11；D13S317：10，12；D16S539：9，12；D18S51：12；D19S433：13，14；D21S11：30.2；D2S1338：17，25；D3S1358：16；D5S818：12；D7S820：9，11；D8S1179：14；FGA：24；TH01：9.3；TPOX：11，12；vWA：16，17，OL；

同工酶

染色體 72～88

使用權限 A類

人永生化表皮細胞；HaCaT培養(yǎng)貼壁細胞: 對于貼壁細胞應先吸(倒)盡培養(yǎng)基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱（或PBS洗1－3次）。50ml培養(yǎng)瓶加入消化液約1-3ml，按此比例進行消化，(根據(jù)經(jīng)驗)，晃動使消化液鋪均勻置37度培養(yǎng)箱約2-5分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數(shù)脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml*培養(yǎng)基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基后繼續(xù)培養(yǎng)或?qū)嶒灐?/span>
操作流程：
1.1 主要試劑與儀器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存：
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液（37℃預熱，8～10倍體積）離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi)，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然后加入倍量的培養(yǎng)基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞，待細胞變圓、脫壁并浮起，加入少量培養(yǎng)基離心，再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側(cè)加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù)，按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液＝(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生長期的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中，每兩小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ×100％，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生長期的細胞用消化制成單細胞懸液，以1×104/孔接種于24孔板，每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔，計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。連續(xù)計數(shù)10d，繪制細胞生長曲線

NcoI規(guī)格：1000 units

NdeI規(guī)格：500 units

NdeI規(guī)格：2500 units

NdeI規(guī)格：4000 units

NotI規(guī)格：300 units

NotI規(guī)格：1500 units

NotI, HC規(guī)格：1500 units

NotI規(guī)格：500 units

PaeI (SphI)規(guī)格：500 units

PaeI (SphI)規(guī)格：2500 units

PstI規(guī)格：3000 units

PstI規(guī)格：5x3000 units

PstI規(guī)格：10000 units

PvuI規(guī)格：300 units

PvuI規(guī)格：1500 units

PvuII規(guī)格：2500 units

PvuII, HC規(guī)格：12500 units

PvuII規(guī)格：5000 units

SalI規(guī)格：1500 units

SalI規(guī)格：5x1500 units

SalI規(guī)格：2000 units

SduI (Bsp1286I)規(guī)格：500 units

SmaI規(guī)格：1200 units

SmaI規(guī)格：5x1200 units

SmaI, HC規(guī)格：6000 units

MASP2 英文名稱： 甘露聚糖結(jié)合凝集素絲酸肽酶2抗體 0.1ml

phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名稱： 磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 0.1ml

Anti-Phospho-Caspase-9 (Pry153) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化白介素1-β轉(zhuǎn)化酶樣凋亡蛋白酶6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
懸浮細胞: 一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)，加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，如要高濃度可先離心1000rpm，5min后加入*培養(yǎng)基，輕輕吹勻后，分置其它培養(yǎng)瓶內(nèi)加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系這個詞表示細胞群除非細胞經(jīng)過了遺傳改造。