體液樣本中細(xì)胞外囊泡的分析工具

PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（鏈霉親和素HRP）

　　本試劑盒是可用于細(xì)胞培養(yǎng)上清和體液樣本中細(xì)胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶聯(lián)免疫試劑。將能與細(xì)胞外囊泡表面的磷脂酰絲氨酸（PS）特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)預(yù)包被到板上，細(xì)胞外囊泡與其反應(yīng)被固定后，以目的細(xì)胞外囊泡表面標(biāo)記蛋白的生物素標(biāo)記抗體作為檢測一抗，以試劑盒中的HRP標(biāo)記鏈霉親和素為二抗，可高靈敏度檢測表面具有靶標(biāo)記蛋白的細(xì)胞外囊泡。同時(shí)，可用不同物種的生物素標(biāo)記抗體作為檢測一抗。此外，二抗采用HRP標(biāo)記鏈霉親和素，與血液成分的非特異性結(jié)合低，可高靈敏度檢測血液樣本中的細(xì)胞外囊泡。

◆特點(diǎn)

●　高靈敏度和定量檢測

　  可以直接檢測樣本中的細(xì)胞外囊泡（無需分離）

　  可以從2.5微升左右的血液樣本中檢測細(xì)胞外囊泡（節(jié)約樣本）

　  靈敏度是WB法的50~1000倍（檢測微量信號）

●　應(yīng)用廣泛

      可定性或定量檢測培養(yǎng)上清和血液樣本中的細(xì)胞外囊泡

      測定EV-depleted FBS中殘留的細(xì)胞外囊泡數(shù)量

      使用凝集素分析外泌體的糖鏈

●　通用的生物素標(biāo)記檢測方法

      一抗可靈活更換成不同動物來源的抗體或凝集素等的生物素標(biāo)記一抗

●　操作簡單以及再現(xiàn)性高

      優(yōu)化細(xì)胞外囊泡檢測用的試劑盒和試劑

◆檢測原理

　　Wako試劑盒PS Capture™ 外泌體ELISA 試劑盒（抗小鼠IgG POD）（圖右）中，一抗使用小鼠抗體，二抗使用抗小鼠IgG抗體，但是本試劑盒（圖左），使用生物素標(biāo)記抗體作為一抗，二抗使用HRP標(biāo)記的鏈霉親和素。因此，可以不受限于抗體種類分析細(xì)胞外囊泡。

◆試劑盒組成

◆對應(yīng)樣本

◆數(shù)據(jù)

■　血液樣本以及培養(yǎng)上清液樣本的稀釋線性

用從COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清液中純化的細(xì)胞外囊泡制成的標(biāo)準(zhǔn)曲線為基準(zhǔn)，檢測①人血清稀釋樣本，②人肝素血漿稀釋樣本，③人EDTA血漿稀釋樣本（各2個(gè)樣本，稀釋4次）以及④COLO201細(xì)胞培養(yǎng)上清液稀釋4次的樣本中的外泌體濃度（檢測CD63），評價(jià)各個(gè)樣本的稀釋線性。

結(jié)果表明，在CD63檢測中，血清和肝素血漿樣本在雙倍稀釋或更高稀釋度下可獲得良好的線性。EDTA血漿樣本在5倍以上稀釋度下可獲得良好的線性。

■　PS親和法和抗體法的比較（捕獲EVs的能力）

將預(yù)處理^※1的各個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液分別添加至已固相化的抗CD抗體(CD9, CD63, CD81)或Tim4微孔板的各個(gè)孔中進(jìn)行反應(yīng)。然后，用各個(gè)生物素標(biāo)記抗CD抗體(CD9, CD63, CD81)檢測結(jié)合的外泌體。

※1 預(yù)處理?xiàng)l件: 10,000×g, 30分鐘

PS親和法與抗體法相比，更高效率地捕抓到了各種細(xì)胞株來源的外泌體

■　測定市面上“無外泌體血清”中殘留的外泌體數(shù)量

用生物素標(biāo)記抗CD9抗體^※4檢測未處理的FBS，市場上售賣的“無外泌體血清”（EV-depleted FBS）以及超離處理的FBS (UC-treated FBS)^※3 中殘存的外泌體。

※3 超離條件: 160,000×g, 16小時(shí)

※4 用Biotin Labeling Kit-SH 標(biāo)記抗CD9抗體。

Capture: Tim4 / Detection: 生物素標(biāo)記抗CD9抗體

使用PS親和法的ELISA系統(tǒng)，可以簡單便利地檢測到外泌體殘留量。

■　應(yīng)用于糖鏈分析：rBC2LCN凝集素和Tim4的雙抗夾心ELISA

用生物素標(biāo)記抗CD63抗體和生物素標(biāo)記rBC2LCN凝集素^※6檢測預(yù)處理完成^※5的5倍稀釋iPS細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的外泌體。

※5 預(yù)處理?xiàng)l件: 10,000×g, 30分鐘

※6用 EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin標(biāo)記rBC2LCN。

捕獲用抗體: Tim4 / 檢測用抗體: 各生物素標(biāo)記體

通過與各種凝集素相組合，可應(yīng)用于外泌體表面上的糖鏈分析。

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■　檢測人正常血液樣本中外泌體標(biāo)記物的相對濃度

準(zhǔn)備人血清（10個(gè)樣本），EDTA血漿（9個(gè)樣本）和肝素血漿（9個(gè)樣本）作為正常血液樣本，檢測外泌體標(biāo)記物CD63和CD9，以及被認(rèn)為是癌細(xì)胞外泌體特異性標(biāo)記物的EpCAM。

結(jié)果顯示，在各個(gè)血液樣本中均檢測出了外泌體標(biāo)記物CD63和CD9，但只有在癌細(xì)胞外泌體中才檢測出極微量的表面抗原EpCAM。

■　COLO201來源純化外泌體的添加回收測試

準(zhǔn)備混合血清，EDTA血漿，肝素血漿的2倍稀釋液，并添加從COLO 201細(xì)胞培養(yǎng)上清中提取的3種濃度的COLO201來源外泌體，以EpCAM檢測來確認(rèn)回收率。

在EpCAM檢測中，添加回收率在100％±10％的范圍內(nèi)，顯示出良好的回收性能※。

※考慮到【血液檢體的稀釋線性】，EDTA血漿樣本建議稀釋5倍以上進(jìn)行檢測。

◆產(chǎn)品列表

◆抗外泌體標(biāo)記抗體系列

◆相關(guān)產(chǎn)品