熒光基因擴增儀檢測系統(tǒng)(QPCR)基礎(chǔ)知識

  1. QPCR的概念QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng)，也叫實時定量基因擴增熒光檢測系統(tǒng)，簡稱QPCR。

  2. 相比以前的方法，QPCR的特點n 所用儀器少，只用一臺儀器。n 檢測時間短，只須45分鐘～1小時10分鐘（試劑各異），而定性PCR須3～4小時，酶免終點定量須5～6小時，熒光終點定量須2～3小時。n 操作極其簡單：前處理后，樣本插入儀器一小時后到電腦上來出報告即可，無須開蓋，移樣本（以前方法），避免污染。n 結(jié)果：定性PCR只能定性，很粗略，終點定量PCR由于只能在40個熱循環(huán)結(jié)束后檢測熒光，被測熒光達到飽和導致定量不夠，屬于半定量狀態(tài)。而實時熒光QPCR是在擴增的每時每刻連續(xù)檢測各樣本的熒光值的變化，如圖一所示：檢測動態(tài)范圍：100～1010 DNA copies/ml檢測精度：0.1RLU辨別率：5000和10,000個模板拷貝樣本的辨別率99.7％。

  3. QPCR的技術(shù)*性、價格及應用現(xiàn)狀實時熒光QPCR是當今世界用于臨床的核酸分子診斷技術(shù)，被美國FDA承認并推崇，被美國FDA批準并取得臨床應用執(zhí)照的QPCR試劑品種有：HBVDNA，HCV丙肝RNA，HIV愛滋病RNA，Chlamydi trachomatis（CT），性傳播疾病，沙眼衣原體，Neiserria gonorrhea (NG)，性傳播疾病，淋病雙球菌，Cytomegalovirus（CMV），性傳播疾病，巨細胞，Mybobacterium tuberculosis（Mtb），呼吸道疾病，結(jié)核分支桿菌等。
  4. QPCR、DNA檢測、PCR之間的關(guān)系聚合酶鏈式反應（Polymerase Chain Reaction簡稱PCR）原理憑借敏感、特異、快速的特點榮獲93年諾貝爾化學獎。因其在病原體檢測方面的*優(yōu)勢，因而發(fā)達在相關(guān)方法和儀器方面的研發(fā)非常快，成為分子生物學診斷的主流，至今仍處于學術(shù)和應用前沿：代產(chǎn)品：基因擴增儀系列熱循環(huán)儀（DNA Thermal Cycler）+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑，構(gòu)成PCR定性檢測。第二代產(chǎn)品：基因擴增熱循環(huán)儀+熒光儀+終點定量試劑，構(gòu)成PCR-DNA終點法定量檢測（End-point quantitative PCR detection），又分為終點酶免定量（ End-point ELISA-PCR）和終點熒光定量（End-point Fluor-PCR）兩種。第三代產(chǎn)品：實時定量QPCR儀＋實時熒光定量試劑，構(gòu)成QPCR-DAN/RNA實時熒光定量檢測。

 5. QPCR的應用領(lǐng)域答：熒光基因擴增儀主要應用在醫(yī)療檢驗、疾病防控、食品安全、農(nóng)業(yè)、林業(yè)、畜牧養(yǎng)殖、水產(chǎn)養(yǎng)殖、分子生物、法醫(yī)鑒定、科研探究等諸多領(lǐng)域。