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免疫組化實驗外包服務(wù)

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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生物實驗

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北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司(嘉美實驗)是一家專注于生命科學(xué)領(lǐng)域的高科技企業(yè),公司創(chuàng)立于2005年,由在國內(nèi)科研試劑、實驗技術(shù)、質(zhì)量管理領(lǐng)域有著十幾年從業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)、專家團(tuán)隊組建而成;2009年在北京重組,先后成立了北京嘉美諾斯生物科技有限公司(主要開展生物相關(guān)產(chǎn)品進(jìn)、出口業(yè)務(wù)),北京嘉美紐諾生物科技有限公司(主要為大型藥廠、診斷試劑公司提供服務(wù))。為方便實驗服務(wù)項目開展,成立了北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司,以“嘉美實驗”品牌提供實驗外包服務(wù)。近五年來,公司已為全國各類科研用戶提供了近5000個大大小小的專項實驗外包或整體課題外包項目服務(wù),實驗項目涵蓋了生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)的各研究領(lǐng)域。經(jīng)過多年努力,公司已成為北京地區(qū)Maximum、Most professional、Most efficient的生物實驗外包服務(wù)平臺。已成功為協(xié)和醫(yī)院、liberation army總醫(yī)院等全國數(shù)百家醫(yī)院提供了優(yōu)質(zhì)的實驗外包服務(wù)。

嘉美實驗面對醫(yī)學(xué)院及其附屬醫(yī)院、醫(yī)藥科研院所、大學(xué)生命*、中科院、藥企等類型單位提供單項和整體課題實驗外包服務(wù)。對于科研任務(wù)繁重但工作繁忙而無暇分身的臨床醫(yī)生而言,我們的實驗外包服務(wù)尤為需要,只需要實驗委托者將課題交付我們,剩下的工作由嘉美實驗完成,這為實驗委托者節(jié)約了大量寶貴的時間和精力,提高了生活品質(zhì)。對于面臨畢業(yè)的廣大碩士、博士而言,我們樂于一起探討課題方案的合理性并給出建議,Maximum degree上優(yōu)化實驗方案和節(jié)約資金。對于課題也許您還只是個設(shè)想,嘉美生物卻能將您的設(shè)想變?yōu)橐粋€個成功的實驗碩果。

嘉美實驗所追求的目標(biāo)不僅僅是一個科研課題實施的過程;我們更多的是關(guān)注實驗前后的每個環(huán)節(jié),真正成為實驗委托者在醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究路上的良師益友。“專注生物技術(shù),服務(wù)生命科學(xué)”,為您構(gòu)筑醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究的一座座豐碑!

服務(wù)特點
結(jié)果可靠:行業(yè)老牌企業(yè),11年技術(shù)服務(wù)經(jīng)驗沉淀,質(zhì)量全程管控,實驗結(jié)果可靠。
數(shù)據(jù)規(guī)范:326家醫(yī)院,68所高校,近5000個項目的積累,嚴(yán)格遵循行業(yè)學(xué)術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。
服務(wù)高效:線上線下7X24小時,多渠道響應(yīng)咨詢及服務(wù)需求,確保溝通及時、暢通。
配套齊全:從課題設(shè)計、試劑購買、實驗開展、SCI論文發(fā)表,可提供一站式配套服務(wù)。
管理精細(xì):公司以客戶需求為中心,管理流程規(guī)范、保密機(jī)制嚴(yán)格,成本控制有效。

服務(wù)流程
1、提供項目方案:客戶根據(jù)課題標(biāo)書及需做實驗的主體內(nèi)容,擬定并提供初步的項目方案,含課題申請書,實驗方案,實驗設(shè)計,實驗思路,實驗文獻(xiàn)等與實驗相關(guān)等內(nèi)容和資料;
2、項目評估報價:公司技術(shù)團(tuán)隊根據(jù)客戶提供的相關(guān)資料,綜合評估項目可行性,與客戶共同確定準(zhǔn)確的實驗項目執(zhí)行方案,給出準(zhǔn)確的實驗價格;
3、簽訂服務(wù)協(xié)議:簽署服務(wù)協(xié)議并預(yù)付部分費用,做好實驗初步準(zhǔn)備及項目預(yù)安排;
4、執(zhí)行服務(wù)項目:正式啟動實驗進(jìn)程,全面展開實驗,確保項目有效執(zhí)行;
5、溝通項目進(jìn)展:及時溝通反饋實驗的Newest進(jìn)展,隨時了解掌控實驗的Newest動態(tài);
6、完成項目交付:支付剩余尾款,交付實驗結(jié)果,正確應(yīng)用實驗結(jié)果,提供售后服務(wù)。

生物實驗外包

產(chǎn)地類別 進(jìn)口


嘉美免疫組化實驗特色介紹


一、嘉美實驗可以提供:實驗所需抗體,即提供一抗

二、
嘉美實驗可以提供:提供一抗之外,所有免疫組化實驗試劑

三、實驗委托者只需要提供:組織、蠟塊、切片,任意一種標(biāo)本即可



 

一、免疫組化實驗介紹

免疫組化是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑 (熒光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry)。

 

二、免疫組化主要步驟(sABC法為例子)


1. 洗載玻片: 將載玻片置于重鉻酸鉀和濃H2SO4混合液中,目的是為了是載玻片上的硅膠等除去,同時使一些肉眼看不見的凹凸不平的表面變平整,便于組織吸附,然后置于清水中清洗,除去殘余的重鉻酸鉀和濃H2SO4(大約沖一個小時左右),再將載玻片浸泡于酒精之中, 然后放到架子上,置于37°C溫箱中,將多聚賴氨酸涂布于玻片的表面,由于Lys帶正電,而大多數(shù)的組織帶負(fù)電荷,從而產(chǎn)生吸附作用。


2. 包埋組織: 先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟,先稍微冷卻,然后再將待包埋的組織置于石蠟之中,并排列整齊,再將塑料模具盒蓋上,后加入少許液體石蠟,進(jìn)行冷凍,使石蠟變成固態(tài)。


3. 切片:將包埋好的組織從模具上取下來,并置于石蠟切片機(jī)上,切片機(jī)通過調(diào)節(jié)上下左右來來使組織和切割方向*,然后調(diào)節(jié)切片的厚度,一般為5 um,如果比較難切,則可以適當(dāng)調(diào)整厚度,用毛筆將切割的載玻片向外拉,并用小鑷子將包含有完整組織的載玻片置于40°C溫水中。


4. 撈組織:當(dāng)組織載玻片置于40°C溫水中之前,要先將水浴中的氣泡趕走,以免氣泡受熱上浮而貼到組織上,組織受熱展開,Best是組織不起皺紋,用載玻片撈組織時,一般取載玻片的下1/3或者下1/2一般每種組織撈5-6張,其中2-3張是備用的,每張載玻片上通常撈兩份組織,做對照使用,這樣形成的誤差就比較小了,而且撈載玻片的時候Best方向*,以便觀察,再將撈出來的載玻片置于架子上,放入37°C溫箱中烘干。


5. 脫蠟:依次將載玻片放入二甲苯-二甲苯-*酒精-*酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精,起脫蠟作用的主要是二甲苯,依據(jù)的是相似相溶的原理.一般在每個試劑中放10min,天氣熱可以少放幾分鐘,相反,天氣較冷的話,就要適當(dāng)延長脫蠟時間,一般為12-15min.


6. 抗原修復(fù):脫蠟后在清水中沖洗一段時間,加入3%H2O2浸泡10min,從而除去內(nèi)源性的過氧化氫酶,然后倒掉H2O2,在清水中洗兩次,再加入檸檬酸緩沖液,放入微波爐中蒸煮3min(中火),一般剛到沸騰即可,冷卻至室溫,然后再蒸煮一次,冷卻至室溫,蒸煮的目的是為了使抗原的位點暴露出來。


7. 血清封閉:冷卻至室溫后,將檸檬酸緩沖液倒掉,水洗2次,并將載玻片置于PBS中5min,洗2次,擦干組織周圍的PBS液,馬上加上血清,使一些非特異性的位點封閉起來,然后放入37°C溫箱中半小時。血清稀釋10倍(血清封閉液)。


8. 加一抗:將溫箱中的載玻片取出,用吸水紙擦干載玻片反面和正面組織周圍的血清,加一抗,如果做對照實驗,就在對照的組織上加PBS。加完一抗后于4°C冰箱中保存過夜。


9. 加二抗:將載玻片從冰箱中取出,放入PBS中洗3次,每次5min,擦干組織周圍的PBS后加上二抗,然后置于37°C溫箱中半小時。


10. 加SABC: 將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,每次5min,擦干組織周圍的PBS后加上SABC, 然后置于37°C溫箱中半小時。SABC稀釋100倍。


11. 加顯色劑: 將片子從溫箱中取出, 放入PBS中洗3次,每次5min,擦干組織周圍的PBS后加上顯色劑。(顯色劑的配置:在1ml水中加1滴顯色劑A,搖勻,然后加1滴顯色劑B,搖勻,再加1滴顯色劑C,搖勻)   A:DAB        B:H2O2        C:磷酸緩沖液


12. 復(fù)染: 將顯色后的片子用清水沖洗一段時間后,浸泡于蘇木精中染色,一般動物組織為半分鐘,植物組織3-5min。


13. 脫水:將復(fù)染后的片子置于水中沖洗后,依次將載玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-*酒精-*酒精-二甲苯-二甲苯。每個試劑中放置2min,后浸泡在二甲苯中,搬到通風(fēng)柜中。


14. 封片:用中性樹膠滴在組織旁邊,再用蓋玻片蓋上,要先放平一側(cè),然后輕輕放下另一側(cè),以免產(chǎn)生氣泡,封好片子后置于通風(fēng)柜中晾干。

 

三、免疫組化試劑

【免疫組化的相關(guān)試劑】:重要的是選擇好一抗、二抗或者還有三抗,注意抗體的特異性、效價和交叉反應(yīng)。

【其他常用試劑有】:

1、0.01M(pH7.4)的磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS),稀釋抗體和洗片子用;

2、清潔液、純水,洗玻片用

3、多聚賴氨酸處理載玻片,防止脫片

4、固定液:4%多聚甲醛或冷丙酮等;

5、15%~30%蔗糖,組織脫水用;

6、梯度酒精脫水、二甲苯透明、石蠟包埋,或者OCT包埋做冰凍切片;

7、抗原修復(fù)液:枸櫞酸緩沖液(pH6.0);

8、活化劑:EDTA或者Triton X-100;

9、1%~10%牛血清清蛋白(BSA)封閉液;

10、H2O2,滅活內(nèi)源性過氧化物酶;

11、顯色液:根據(jù)你做的酶來選擇,如果是HRP就用DAB,如果是AKP,就用NBT/BCIP,免疫熒光則不需要;

12、50%緩沖甘油封片液。
 

四、免疫組化樣本說明


1、石蠟切片

取材:1、組織離體后需及時固定;2、組織標(biāo)本不宜過大、過厚。

固定:1、固定液:10%福爾馬林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量與組織體積比為10:1~20:1;3、固定:適宜的固定時間,主要根據(jù)材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。

保存:切片經(jīng)60℃烤片3-5小時后,可于常溫或4℃干燥保存。


2、冰凍切片

取材:取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。

固定:樣本冰凍切片后,應(yīng)立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。

保存:固定好的切片自然風(fēng)干,密封后置于-80℃、-20℃保存,盡快用于后續(xù)實驗。


3、細(xì)胞塊石蠟切片

細(xì)胞量較多的樣品,可離心分離所需細(xì)胞,用中性甲醛固定后制作成瓊脂細(xì)胞塊,然后按照制作石蠟切片的操作流程進(jìn)行切片。


4、細(xì)胞爬片

在孔板里做的細(xì)胞爬片,爬片取出后,用PBS洗滌2次(根據(jù)研究目的,PBS洗滌可選擇不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分鐘,將表面液體吹干,置于-20℃保存。若在短時間內(nèi)即開展實驗,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段時間。


5、細(xì)胞涂片

細(xì)胞涂片常用的固定液有95%酒精(較為常用)、酒精-冰醋酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。 

 

五、免疫組化實驗注意事項

1、常用的固定液為中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多數(shù)抗原保存良好,適用于免疫組織化學(xué)。

2、病理實驗切片Best是防脫片,以免實驗過程中出現(xiàn)掉片。若客戶提供切片,應(yīng)告知切片有無防脫處理。

3、骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本,實驗過程中有較高的掉片幾率。

4、客戶可提供組織塊(以10%福爾馬林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如組織塊極小請事先說明)、蠟塊或切片(使用免疫組化切片,以避免實驗過程中掉片)

5、待檢測蛋白的種屬、實驗分組情況及實驗背景資料、其他具體要求等需事先說明。

6、若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進(jìn)行實驗,需進(jìn)行脫鈣處理。

7、浸泡在固定液中的組織樣本,在運輸中容器需密封,防止破碎、滲漏。

 



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