透射電鏡(TEM)檢測服務(wù)
- 公司名稱 北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2019/3/19 16:40:42
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產(chǎn)地類別 | 進(jìn)口 |
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透射電鏡(TEM)檢測服務(wù)
一、實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介
透射電鏡,即透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,簡稱TEM),通常稱作電子顯微鏡或電鏡(EM),是使用較為廣泛的一類電鏡。結(jié)構(gòu)的研究從尺度方面可以分為宏觀研究和微觀研究,而生命科學(xué)的研究主要集中在微觀方面,從個(gè)體水平到分子水平的研究分辨率在0.2mm以上可以用用肉眼觀察,分辨率在0.2mm-0.2um之間可以用光鏡觀察,分辨率在0.2um-0.2nm之間就一定要用電子顯微鏡(簡稱電鏡)技術(shù),而細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)及相關(guān)細(xì)胞器多數(shù)在0.2um-0.2nm之間,所以這個(gè)尺度又稱為亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),而細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化主要表現(xiàn)在亞細(xì)胞水平,這種變化與之對應(yīng)的功能變化也敏感,所以生命科學(xué)的很多問題都集中在這個(gè)尺度范圍內(nèi),那么電鏡就成為這個(gè)尺度研究的主要工具。
實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:由照明部分提供的有一定孔徑角和強(qiáng)度的電子束平行地投影到處于物鏡物平面處的樣品上,通過樣品和物鏡的電子束在物鏡后焦面上形成衍射振幅*值,即*幅衍射譜。這些衍射束在物鏡的象平面上相互干涉形成*幅反映試樣為微區(qū)特征的電子圖象。通過聚焦(調(diào)節(jié)物鏡激磁電流),使物鏡的象平面與中間鏡的物平面相*,中間鏡的象平面與投影鏡的物平面相*,投影鏡的象平面與熒光屏相*,這樣在熒光屏上就察觀到一幅經(jīng)物鏡、中間鏡和投影鏡放大后有一定襯度和放大倍數(shù)的電子圖象。由于試樣各微區(qū)的厚度、原子序數(shù)、晶體結(jié)構(gòu)或晶體取向不同,通過試樣和物鏡的電子束強(qiáng)度產(chǎn)生差異,因而在熒光屏上顯現(xiàn)出由暗亮差別所反映出的試樣微區(qū)特征的顯微電子圖象。
二、實(shí)驗(yàn)操作流程
1、取材:組織塊小于1立方毫米
2、固定
3、脫水
4、包埋
5、超薄切片機(jī)切片70nm
6、3%醋酸鈾-枸櫞酸鉛雙染色
7、透射電鏡觀察,拍片
三、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、客戶提供
1)細(xì)胞,數(shù)量要求:10^6次方以上。生長在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)板上細(xì)胞取材,若是懸浮的細(xì)胞將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到尖底 EP管里直接離心,貼壁細(xì)胞就先倒出培養(yǎng)液,用胰蛋白酶消化或用細(xì)胞刮刮下,而后帶培養(yǎng)液一起低速離心,800-1200 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 5-10 分鐘使細(xì)胞沉淀成團(tuán),離心完后倒出培養(yǎng)液,沿壁緩慢加入電鏡固定液(1.5%-2.5%中性戊二醛),注意不要把細(xì)胞團(tuán)打散。4℃下固定 15 分鐘或以上再送檢。若細(xì)胞團(tuán)太小,注意要用1ml 甚至 0.5ml 尖底 EP 管來進(jìn)行固定、保存。
2)肌肉:觀察縱切面時(shí)沿著肌束方向,用鋒利的刀片或剪刀在取出的組織一邊取出 1-3 條細(xì)長的肌束,橫截面約 1mm*1mm,投入到 2-8℃的電鏡固定液(2.5%中性戊二醛)里。若有條件,為防止肌肉收縮變形,可將取出的肌束貼在載玻片毛玻璃一側(cè),使其略微伸展。再將貼好標(biāo)本的載玻片放入戊二醛中進(jìn)行固定。若無,則可取出長條狀組織后,垂直緩慢放入固定液中,懸空在固定液里稍等 3 秒再放入。
3)植物、昆蟲等密度比固定液低的樣品:必須先用針筒或抽真空儀器先抽氣,再使標(biāo)本沉入固定液中。
2、交付標(biāo)準(zhǔn):
1)掃描照片、讀片分析
2)完整項(xiàng)目報(bào)告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)
3、其他
1)組織從生物活體取下來以后,需要立即處理,否則由于細(xì)胞內(nèi)部的各種酶的作用,出現(xiàn)細(xì)胞自溶現(xiàn)象,還有可能被污染,所以必須做到快,小,準(zhǔn),冷(0-4攝氏度)。
2)超薄切片的切片面積大不能超過0.5mm×0.3mm,比較難切的植物樣品要求切片面積更小。
3)檬酸鉛染液極易和空氣中的二氧化碳反應(yīng)形成不溶解的黑色顆粒,污染切片。檸檬酸鉛染液一定要現(xiàn)用相配,所用的雙蒸水一定要煮沸除去二氧化。
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