TUNEL組織細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
- 公司名稱 北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2019/3/19 16:46:08
- 訪問次數(shù) 527
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| 產(chǎn)地類別 | 進(jìn)口 |
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TUNEL組織細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
嘉美實(shí)驗(yàn)Tunel特色實(shí)驗(yàn)介紹
一、實(shí)驗(yàn)委托者只需要提供：組織、蠟塊、切片，任意一種標(biāo)本即可
二、嘉美實(shí)驗(yàn)可以提供：Tunel凋亡檢測試劑盒及其相關(guān)的所有試劑、耗材
一、TUNEL組織細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)簡介
TUNEL技術(shù)，即脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶( Terminal deoxynucleo tidyl transferase，TdT )介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(TdT mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL ) 技術(shù)是目前原位檢測細(xì)胞凋亡敏感、快速、特異的新方法。細(xì)胞在發(fā)生凋亡時，會激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時抽提DNA進(jìn)行電泳檢測，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder?；蚪MDNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測
二、檢測步驟
1、脫蠟至水。脫蠟可以先 60ºC 20 min，再用使用二甲苯兩次 5-10 min；水化用梯度乙醇從高濃度到低濃度浸洗，這些以便后面的結(jié)合反應(yīng)充分、均勻
2、PBS漂洗
3、蛋白酶K消化
4、滅活內(nèi)源性過氧化酶物
5、生物素標(biāo)記
6、孵育Streptavidin-HRP
7、底物與DAB反應(yīng)顯色
8、脫水、透明、封片
9、顯微鏡觀察、照相
三、樣本說明
1、石蠟切片
取材：1）組織離體后需及時固定；2）組織標(biāo)本不宜過大、過厚。
固定：1）固定液：10%福爾馬林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2）用量：一般固定液的量與組織體積比為10:1～20:1；3）固定：適宜的固定時間，主要根據(jù)材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存：切片經(jīng)60℃烤片3-5小時后，可于常溫或4℃干燥保存。
2、冰凍切片
取材：取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定：樣本冰凍切片后，應(yīng)立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存：固定好的切片自然風(fēng)干，密封后置于-80℃、-20℃保存，盡快用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、細(xì)胞塊石蠟切片
細(xì)胞量較多的樣品，可離心分離所需細(xì)胞，用中性甲醛固定后制作成瓊脂細(xì)胞塊，然后按照制作石蠟切片的操作流程進(jìn)行切片。
4、細(xì)胞爬片
在孔板里做的細(xì)胞爬片，爬片取出后，用PBS洗滌2次（根據(jù)研究目的，PBS洗滌可選擇不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分鐘，將表面液體吹干，置于-20℃保存。若在短時間內(nèi)即開展實(shí)驗(yàn)，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段時間。
5、細(xì)胞涂片
細(xì)胞涂片常用的固定液有95%酒精（為常用）、酒精-冰醋酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。
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