天狼猩紅（Sirius Red）染色
- 公司名稱 北京嘉美臻元生物技術(shù)有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2019/3/20 15:58:59
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| 產(chǎn)地類別 | 進(jìn)口 |
|---|
天狼猩紅（Sirius Red）染色
一、天狼猩紅（Sirius Red）染色簡介
利用膠原蛋白聚合及其纏繞螺旋排列不同的特點(diǎn)，使用天狼星紅苦味酸染色法，在偏振光顯微鏡下，可以根據(jù)雙折光性和著色的不同，分別顯示出四型（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）膠原纖維。區(qū)分并定量這四種膠原纖維，對于研究病變的發(fā)生機(jī)理和演變過程有一定的意義。
二、試劑配制
1、天狼星紅-飽和苦味酸液：0.5%天狼星紅10ml，苦味酸飽和水溶液90ml。
2、天青石藍(lán)液：天青石藍(lán)B 1.25g，鐵明礬1.25g，蒸餾水250ml。溶解煮沸，冷卻后過濾，加入甘油30ml，然后再加入濃硫酸0.5ml（硫酸一定要后加入）。
三、染色步驟
1、石蠟切片脫蠟至水。
2、天青石藍(lán)液5~10min
3、蒸餾水沖洗3次
4、天狼星紅飽和苦味酸液15~30min（可用Harris蘇木素液淡染細(xì)胞核）
5、無水乙醇分化與脫水。
6、 二甲苯透明、光學(xué)樹膠封固
7、結(jié)果：
1）普通光鏡觀察：膠原纖維呈紅色，細(xì)胞核呈綠色，其他成分呈黃色。
2）偏振光顯微鏡下觀察：
3）Ⅰ型膠原纖維：紅色或黃色，排列緊密，具強(qiáng)雙折光性
4）Ⅱ型膠原纖維：多種色彩，疏松網(wǎng)狀、弱雙折光性
5）Ⅲ型膠原纖維：綠色、細(xì)纖維、弱雙折光性
6、Ⅳ型膠原纖維：淡黃色、弱雙折光性（基膜成分）
四、樣本說明
1、石蠟切片
取材：1、組織離體后需及時固定；2、組織標(biāo)本不宜過大、過厚。
固定：1、固定液：10%福爾馬林（4%多聚甲醛）或10%中性甲醛；2、用量：一般固定液的量與組織體積比為10:1～20:1；3、固定：適宜的固定時間，主要根據(jù)材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。
保存：切片經(jīng)60℃烤片3-5小時后，可于常溫或4℃干燥保存。
2、冰凍切片
取材：取材后需立即置于超低溫冰箱或液氮中保存。
固定：樣本冰凍切片后，應(yīng)立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。
保存：固定好的切片自然風(fēng)干，密封后置于-80℃、-20℃保存，盡快用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
3、細(xì)胞塊石蠟切片
細(xì)胞量較多的樣品，可離心分離所需細(xì)胞，用中性甲醛固定后制作成瓊脂細(xì)胞塊，然后按照制作石蠟切片的操作流程進(jìn)行切片。
4、細(xì)胞爬片
在孔板里做的細(xì)胞爬片，爬片取出后，用PBS洗滌2次（根據(jù)研究目的，PBS洗滌可選擇不做），用4%多聚甲醛4℃固定15分鐘，將表面液體吹干，置于-20℃保存。若在短時間內(nèi)即開展實(shí)驗(yàn)，可在加固定液后，于4℃冰箱中放置一段時間。
5、細(xì)胞涂片
細(xì)胞涂片常用的固定液有95%酒精（為常用）、酒精-冰醋酸液、Ethyl ether-酒精液和Carney’s液等。
五、免疫組化實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1、常用的固定液為中性甲醛和4%多聚甲醛，能使大多數(shù)抗原保存良好，適用于免疫組織化學(xué)。
2、病理實(shí)驗(yàn)切片Best是防脫片，以免實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)掉片。若客戶提供切片，應(yīng)告知切片有無防脫處理。
3、骨組織、皮膚組織或脂肪含量較高的樣本，實(shí)驗(yàn)過程中有較高的掉片幾率。
4、客戶可提供組織塊（以10%福爾馬林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定，如組織塊極小請事先說明）、蠟塊或切片（使用免疫組化切片，以避免實(shí)驗(yàn)過程中掉片）
5、待檢測蛋白的種屬、實(shí)驗(yàn)分組情況及實(shí)驗(yàn)背景資料、其他具體要求等需事先說明。
6、若客戶提供骨組織或鈣化程度較高的組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，需進(jìn)行脫鈣處理。
7、浸泡在固定液中的組織樣本，在運(yùn)輸中容器需密封，防止破碎、滲漏。
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