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Hypoxyprobe™ RED PE Kit 缺氧探針試劑盒

具體成交價以合同協(xié)議為準

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生物先鋒網(wǎng),Biotium EB替代品,chondrex 膠原佐劑,Biocytex VASP現(xiàn)貨,Mybiosource抗體以及盒子,SouthernBiotech(SBA豬,雞,兔子,貓表面分子流式抗體,以及抗體分型試劑盒)

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 1Kit
貨號 HP11-100Kit 應用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 腫瘤缺氧檢測

※缺氧探針試劑盒的如何選擇?
Hypoxyprobe公司缺氧探針試劑盒核心組分為:缺氧探針(Pimonidazole CCI-103F)和缺氧探針的抗體。不同試劑盒中的探針和抗體標記不同。北京博蕾德生物是Hypoxyprobe公司總代理?,F(xiàn)貨常備以下幾款缺氧探針試劑盒。
1) Hypoxyprobe™-1 Kit 此試劑盒適合于免疫熒光和免疫組化和流式檢測,探針抗體不帶標記,需要客戶自己搭配相應的二抗,比如:免疫組化,需要搭配抗小鼠IgG-HRP 二抗,免疫熒光或流式可搭配FITC-抗小鼠IgG-HRP(或者相應的其他標記二抗)。此試劑盒應用靈活方便,適合同時對組化和熒光檢測有需求的客戶,也方便客戶搭配不同的抗體標記,滿足不同的實驗需求。
2Hypoxyprobe™-1 Plus Kit 此試劑盒適用于免疫熒光和免疫組化和流式檢測。不需要搭配二抗。如果做免疫熒光,只需要用到探針和FITC標記的探針抗體,這2個組分。如果做免疫組化,需要用到第3個組分:兔抗FITC-HRP標記的抗體。該試劑盒的優(yōu)點是,同時滿足客戶做免疫熒光和免疫組化要求,不需要客戶自己搭配二抗。
3Hypoxyprobe™-1 Omni Kit 此試劑盒與Hypoxyprobe™-1 Kit 不同的是探針的抗體來源不同,此試劑盒中的抗體為兔來源,探針抗體不帶標記,需要客戶自己搭配相應的二抗。比如:免疫組化,需要搭配抗兔IgG-HRP 二抗,免疫熒光或流式可搭配FITC-抗兔IgG-HRP(或者相應的其他標記二抗)。
4Hypoxyprobe™ Green Kit 此試劑盒適合于免疫熒光和流式檢測。探針抗體為FITC直接標記,可直接用于免疫熒光檢測(直接免疫熒光)或流式檢測,不需要搭配二抗。需要注意研究的組織如有自發(fā)熒光(綠光),比如GFP(一些轉(zhuǎn)基因研究的客戶),不適合這款試劑盒??梢赃x擇其他熒光標記的試劑盒,比如:Hypoxyprobe™ RedAPC(紅光)。
5Hypoxyprobe™ RedAPC此試劑盒適合于免疫熒光和流式檢測。探針抗體為FITC直接標記,可直接用于免疫熒光檢測(直接免疫熒光)或流式,操作簡便,不需要搭配二抗。
※缺氧探針(派諾硝唑) 探針如何溶解?
派諾硝唑(Pimonidazole HCl)是弱堿性鹽酸鹽,水溶性非常好,建議溶解于中性緩沖液(生理鹽水或蒸餾水都可以)。這種水溶性特征有利于在腹腔和靜脈注射時,控制免疫劑量在0.1-0.5 mL之間。(派諾硝唑溶解度:116mg/ml
※在缺氧標記時派諾硝唑(Pimonidazole HCl)免疫劑量是多少?
派諾硝唑與缺氧組織結(jié)合程度取決于硝基咪唑的還原率和組織相對派諾硝唑的結(jié)合率(結(jié)合率與派諾硝唑的濃度和作用時間成正比)。硝基咪唑的還原率很難預測,但是組織相對派諾硝唑的探針的結(jié)合率可以預測。以下是研究表明的給出的派諾硝唑的使用濃度:
1)在球狀組織可以檢測到強信號的缺氧標記染色,( Exposure = 58mg/kg x 1 hour = 58mg/kg-hour.
2)免疫劑量:0.5g/m2(14mg/kg),在人腫瘤組織和正常細胞檢測到強信號的缺氧標記染色。血漿中的派諾硝唑的半衰期是5小時。(Exposure = 14 mg/kg x 5 hours = 70 mg/kg-hour.
3)在小鼠腫瘤組織檢測到強信號的缺氧標記染色,免疫劑量:60mg/kg,血漿中Pimonidazole的半衰期是15min。(Exposure = 60mg/kg x 0.25 hours = 15 mg/kg - hour.
總之,對于大小*的小動物,比如:實驗室大鼠或小鼠,推薦的派諾硝唑的用量是:60mg/kg(kg:動物體重),這個劑量是經(jīng)濟有效的劑量。
由于血流效應,沒有毒性反應或沒有氧濃度變化的的小鼠或大鼠,劑量控制在30 mg/kg to 400 mg/kg 。對于移植腫瘤(在小鼠后肢)派諾硝唑探針劑100mg/kg。
需要注意的是:大于100mg/kg的劑量僅用于移植腫瘤。
對于體重不*的大動物,具體用量取決于接觸表面積。對于人的來說,推薦的用量是:0.5g/m2 ,而對于狗0.28g/m2。
※缺氧探針(Hypoxyprobe-1)是否能進入缺氧腦組織或腫瘤組織。
Hypoxyprobe-1 是水溶性的,其對應游離基/系數(shù)8.5,因此缺氧探針能夠自由進入腦組織以及腦腫瘤組織。
※派諾硝唑是否是體內(nèi)檢測缺氧的合適的標記物?
派諾硝唑被認為是缺氧檢測的金標準標記物。其優(yōu)點是:
1水溶性好116mg/ml 鹽水),這樣靜脈或腹腔免疫動物時,可以把免疫量(體積)控制在較小體積。其他的標記物,例如: CCI-103F 探針水溶性為10mol 或者更低,這個探針常用于花生油,DMSO 配成乳劑用于腹腔注射,避免血液稀釋。
2穩(wěn)定性好。固態(tài)探針4℃或常溫性質(zhì)非常穩(wěn)定,可以保存數(shù)年。高濃度的探針水溶液,避光4℃保存可以保存數(shù)年。探針的抗體,可以再4℃保存1年以上。
3)非危險化學品。對于小鼠,派諾硝唑探針的半數(shù)致死量(LD50)是:728mg/kg,因此被認為是低毒性的非危險化學品。
4)適用于各種免疫檢測。派諾硝唑探針檢測可以用各種檢測方法檢測,例如:免疫熒光、免疫組化,ELISA ,流式等。
※派諾硝唑的探針抗體是否可以用于小鼠組織的檢測?
是的。對于福爾馬林固定的石蠟組織,我們推薦HRP 標記的Fab2二抗(例如:HRP - Goat F(ab')2 Anti-Mouse Ig)。這樣會降低背景,可以用于不同種屬的動物檢測。
※探針激活和缺氧細胞結(jié)合原理是什么?
腫瘤乏氧細胞還原能力強,當具有電子親合力的硝基咪唑主動擴散透過細胞脂膜,在細胞內(nèi)硝基還原酶作用下,硝基被還原,還原產(chǎn)物與大分子物質(zhì)不可逆結(jié)合,滯留在組織內(nèi)。而正常含氧細胞親電子硝基咪唑還原產(chǎn)物立即被氧化,從而用硝基咪唑類化合物在腫瘤內(nèi)的代謝程度來反映腫瘤的乏氧。
※缺氧探針試劑盒中抗體(IgG1)濃度是多少?
Hp1-x盒子中抗體濃度:60ug/mlHp2-x, Hp6-x, Hp7-x,HP8-x,HP10-x中抗體濃度為500ug/ml,其它盒子中,兔來源的抗血清,沒有純化后的抗體IgG濃度確定確定。
※探針注射后,收貨組織的時間是什么時候?
在收獲組織過程中,組織會逐漸缺氧與探針結(jié)合,可能會出現(xiàn)一些假陽性。從時間上來講,組織與探針結(jié)合時間要比收獲組織時間長很多,因此在收貨組織這個短時間內(nèi),信號會很弱,因此在此期間探針濃度是有限的,出現(xiàn)的假陽性是可以忽略的。
對于人組織的研究,活組織檢查通常要在探針免疫后16-24小時后。探針在人血漿中的半衰期是5小時,因此16-24小時代表3-5個半衰期。也就是說在收貨組織時:只有1/8 1/32的初始探針濃度殘留,組織固定后,較大程度的減少非特異性結(jié)合。
在其他的一些的人組織研究中,活組織檢查通常要在探針免疫1-1.5小時,然后組織立即液氮固定。這種操作方法,背景也會很低。盡管這個時候收獲組織:探針濃度在1.5-4小時內(nèi)相對較高,組織固定時間相對探針和組織的作用時間太短,因此不會造成高背景。
對人組織的一些研究一些研究經(jīng)驗,對實驗研究是很有指導意義的。探針免疫小鼠后,半衰期只有0.25小時。這種情況下,1-2小時收獲組織后,低溫快速冷凍固定,會終止非特異性結(jié)合。
※探針結(jié)合的氧分壓臨界值≤10mgHg是如何確定的?
A:在固體組織中很難確定硝基咪唑的氧化率。迄今為止,比較好的實驗方法是來自于Gross et al.’s,比較氧電極測量氧分壓和射線自顯跡法測量放射物標記法。甲氧甲基硝基咪唑結(jié)合的顆粒密度10mmHg氧分壓下,大量增加。其他的研究Chou et al. 也發(fā)現(xiàn)類似的結(jié)果。因此10 mm Hg是一個可信的探針與氧結(jié)合的臨界值。

已知的關(guān)于缺氧探針在小鼠組織的半衰期?

小鼠類型

血漿半衰期(min

參考文獻

WH 雄性

22 ± 1

1

WHT雌性

22

2

C3H/He 雄性

28 ± 2; 23.5; 31.3; 24.6

3; 4; 5; 6

※ 動物內(nèi)體的氧氮反應是否影響派諾硝唑的標記效果?
派諾硝唑的Piperidine基團很容易氧化成N-氧化物代謝物。原則上,會影響派諾硝唑的對缺氧組織的標記效率。動物體內(nèi),缺氧探針的氧氮反應是通過含黃素單氧化酶FMO)激活完成的。FMO在不同動物中的分布是不同的,因此在不同動物種屬血漿中的氮氧化物水平是不同的。有趣的是,派諾硝唑的注射途徑(靜脈或口服)受血漿中氧氮物濃度影響很小。研究表明用:口服和靜脈注射派諾硝唑探針給狗的腫瘤(用CCI-103F作為缺氧標記的對照探針)。強氧化劑例如:過氧酸是由于超氧化物陰離子與NO反應,也可以氧化派諾硝唑探針。盡管這樣,NO的形成不會影響派諾硝唑的探針效果。
首先,通過還原血紅素鐵蛋白復合物 ,氧氮反應是可逆的以及通過組織還原酶,比如組織黃嘌呤脫氫酶以及還原細胞色素還原,派諾硝唑的氧化是有限的。
第二,通過其他探針的對照試驗說明,對缺氧的標記程度不受血漿中氧氮化合物影響。
第三, 氧氮衍生物與派諾硝唑抗體沒有交叉反應,因此對派諾硝唑的檢測沒有任何干擾。
※ 如果探針標記染色結(jié)果與組織缺氧結(jié)果不*怎么辦?
迄今為止,通過派諾硝唑探針染色結(jié)果與組織缺氧檢測結(jié)果一般是*的。
一般來講,如果對派諾硝唑的標記結(jié)果有疑問。一種方法是,對注射派諾硝唑的動物吸氧10%,如果吸氧10%后的動物派諾硝唑探針結(jié)合程度顯著提高,有可能缺氧有可能是由于派諾硝唑結(jié)合造成的。另一種方法是,用兩種缺氧探針標記檢測干預前后,組織氧壓的變化。

 

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