無需預孵育！導入細胞質(zhì)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑             

ProteoCarry ＜Protein Transfection Reagent＞

本產(chǎn)品是將蛋白以及葡聚糖等生物大分子導入細胞內(nèi)，尤其是導入細胞質(zhì)的試劑。傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑存在蛋白滯留在內(nèi)體或溶酶體中的問題，但是由于本產(chǎn)品可以高效地將蛋白運送至細胞質(zhì)，可以廣泛地適用于在評價導入蛋白的細胞內(nèi)功能和抗體導入引起的功能抑制誘導等的實驗。另外與傳統(tǒng)產(chǎn)品不同的是，本品無需與蛋白進行預孵育，所以不會形成復合體，低限度地限制其對蛋白功能的影響。

※本產(chǎn)品僅供研究，研究以外請勿使用。

◆蛋白轉(zhuǎn)染試劑及其問題

蛋白轉(zhuǎn)染試劑（Proteofection試劑）是將重組蛋白和抗體直接導入細胞的工具。與將質(zhì)粒導入以誘導表達目的蛋白的方法相比，可以更迅速地導入目的蛋白，因而受到了廣泛地關(guān)注。

雖然已經(jīng)開發(fā)了許多基于肽、陽離子的脂質(zhì)或聚合物的蛋白轉(zhuǎn)染試劑，但它們都是與蛋白形成復合物后，通過胞吞作用攝入細胞內(nèi)，破壞內(nèi)體膜將其運送至細胞質(zhì)。然而，現(xiàn)有的大部分試劑內(nèi)體膜的破壞活性低，并且從內(nèi)體逃脫不足，導入的蛋白大部分都轉(zhuǎn)移至溶酶體降解系統(tǒng)。本產(chǎn)品是一種新型肽蛋白轉(zhuǎn)染試劑，克服了傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑的缺點，通過強有力的內(nèi)體膜選擇性破壞活性，高效地向細胞質(zhì)運送蛋白，使轉(zhuǎn)導的蛋白在細胞內(nèi)發(fā)揮活性。另外，與傳統(tǒng)的蛋白轉(zhuǎn)染試劑不同，本品無需與蛋白的復合物，不僅僅是蛋白，還可以向細胞質(zhì)導入生物大分子（葡聚糖等）。

圖1.　細胞導入原理的比較

圖2是導入熒光標記IgG的案例。不添加轉(zhuǎn)染試劑時，以內(nèi)體/溶酶體的染色為主，從細胞質(zhì)中無法獲得熒光信號，與之相對的，可以觀察到在本產(chǎn)品案例中，內(nèi)體、細胞質(zhì)被大面積染色。（詳情請參照應用實例）

圖2.　向HeLa細胞導入熒光標記IgG的比較

◆特點

●　基于肽特性的蛋白轉(zhuǎn)染試劑，顯示出高度水溶性。

●　優(yōu)異的內(nèi)體膜破壞活性，與傳統(tǒng)方法相比顯示出高細胞質(zhì)傳達性。

●　無需與導入物質(zhì)進行預孵育，可以簡便且迅速地轉(zhuǎn)染。

●　由于不會與蛋白形成復合物，所以需要添加濃度較高的蛋白，但是可以低限度地抑制對蛋白功能的影響。

●　只需要1小時的處理就可以充分地轉(zhuǎn)染至細胞質(zhì)。

●　有無血清（<10% FBS）不會影響導入效率，可以根據(jù)想要使用的細胞設(shè)計實驗。

●　已有向細胞質(zhì)導入各種蛋白及生物大分子的應用實例。

●　例：IgG抗體、功能性蛋白（Cre recombinase, Saponin）、多糖（葡聚糖）

●　推薦使用濃度幾乎沒有細胞毒性。

◆使用方法概述

1.　向新鮮的培養(yǎng)基（無血清培養(yǎng)基，10%以下含F(xiàn)BS培養(yǎng)基或PBS）添加本產(chǎn)品以及想要導入的蛋白。

1.　（配制轉(zhuǎn)染混合液）。

1.　※無需預孵育

2.　用PBS清洗2次細胞（80%以下的融合狀態(tài)）后，向細胞添加轉(zhuǎn)染混合液。

3.　在轉(zhuǎn)染混合液中培養(yǎng)細胞（~1h）

4.　用PBS清洗2次細胞后，添加新鮮的培養(yǎng)基。

5.　實現(xiàn)各項應用。

◆試劑盒組成

●　ProteoCarry（4 mg）

●　FITC-dextran（2 mg，陽性對照用）

實驗次數(shù)的預測

◆有導入數(shù)據(jù)的細胞

HeLa, SW280, COS7, NIH3T3, HUVEC

參考導入量

※導入效率根據(jù)細胞類型，細胞數(shù)量和蛋白類型各種因素改變。以上數(shù)據(jù)僅供參考，建議每次實驗都要優(yōu)化數(shù)據(jù)。

◆應用實例

1.　向細胞內(nèi)導入FITC-dextran

向HeLa細胞導入FITC-Dextran（培養(yǎng)基的終濃度為200 μg/mL），僅向細胞添加FITC-Dextran時，（Reagent(-)）觀察到點狀的熒光信號，細胞質(zhì)中幾乎沒有觀察到信號；相反，使用本產(chǎn)品時擴散到了整個細胞質(zhì)。

實驗概要：

向HeLa細胞（80% confluent）添加200 μg/mL FITC-dextran, 1×ProteoCarry in α-MEM，并培養(yǎng)1個小時。用PBS清洗細胞后，進行核染色（Hoechst）。

2.　向細胞內(nèi)導入熒光標記IgG

向HeLa細胞導入熒光標記IgG抗體（培養(yǎng)基終濃度為250 μg/mL），僅有抗體添加至細胞時，可以觀察到胞吞作用自發(fā)性攝入點狀的熒光信號，表明抗體停留在內(nèi)體和溶酶體中。另一方面，使用本產(chǎn)品時，不僅能觀察到點狀的內(nèi)體結(jié)構(gòu)，還可以觀察到它主要在細胞質(zhì)中廣泛擴散。

※用熒光信號觀察細胞擴散時，與內(nèi)體相比，由于細胞質(zhì)的體積較大，信號會被稀釋。細胞質(zhì)信號的檢測需要添加高濃度的熒光標記蛋白，在本數(shù)據(jù)中添加了250 μg/mL的熒光標記IgG。

實驗概要：

向HeLa細胞（80% confluent）添加250 μg/mL熒光標記IgG，1×ProteoCarry in α-MEM并培養(yǎng)1小時。用PBS清洗細胞后，進行核染色（Hoechst）。

3.　向細胞內(nèi)導入Cre recombinase

將設(shè)計為Cre recombinase不存在時表達DsRed，只有在Cre recombinase存在時發(fā)生重組表達GFP的質(zhì)粒向HeLa細胞導入基因。相對于導入第二天就表達DsRed的HeLa細胞，使用本產(chǎn)品導入Cre recombinase（培養(yǎng)基終濃度為10 μM），依賴導入細胞內(nèi)的Cre recombinase表達GFP，本產(chǎn)品在維持Cre recombinase的功能下將其導入了細胞。

實驗概要：

向HeLa細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的第二天，向HeLa細胞添加10 μM Cre recombinase, 1×ProteoCarry in α-MEM，并培養(yǎng)1小時。用PBS清洗細胞后，用新的培養(yǎng)基再培養(yǎng)24小時。

◆保存

●　運輸：室溫

●　保存：-20℃

◆產(chǎn)品列表