P19 小鼠畸胎瘤細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）介紹

加拿大渥太華大學(xué)的Mc Burney 等在1982 年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的 , 是一種能夠在體外培養(yǎng)的多能干細(xì)胞, P19 細(xì)胞團(tuán)經(jīng)RA 誘導(dǎo)可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞和纖維母細(xì)胞; 而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO ) 誘導(dǎo)則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細(xì)胞;在P19細(xì)胞向神經(jīng)元分化的過(guò)程中，神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)模式基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過(guò)程, 因此, P19 目前被用作一個(gè)研究神經(jīng)發(fā)育的體外模型。

P19 細(xì)胞作為研究神經(jīng)分化機(jī)制的模型, 顯著區(qū)別于其他細(xì)胞系的四大特點(diǎn)是:

①它具有正常小鼠的二倍體核型, 細(xì)胞分裂快, 可在體外迅速大量擴(kuò)增, 多次傳代也不喪失其分化能力。

②P19 細(xì)胞具有多種分化潛力, 不同誘導(dǎo)條件下可定向分化成不同類型的細(xì)胞, 種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類型細(xì)胞。

③根據(jù)P19 細(xì)胞誘導(dǎo)分化分階段進(jìn)行的特點(diǎn), 能將神經(jīng)分化的早期機(jī)制與參與突起延伸的機(jī)制分開(kāi)研究。

④該細(xì)胞易于轉(zhuǎn)染, 且轉(zhuǎn)染后仍能正常分化, 適于進(jìn)行細(xì)胞基因研究。通過(guò)轉(zhuǎn)染正?；蛲蛔兊哪康幕? 增強(qiáng)或抑制它們的表達(dá)水平可用于研究這些基因在神經(jīng)分化中的作用。另外, 利用反義RNA 阻斷內(nèi)源蛋白的表達(dá), 可用來(lái)觀察這些蛋白在神經(jīng)分化中的作用。

P19 小鼠畸胎瘤細(xì)胞/鏡像綺點(diǎn)（iCell）特性

1） 來(lái)源：胚胎；畸胎癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

3） 含量：>1x106 個(gè)/mL

4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

運(yùn)輸和保存

可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：

（1）干冰運(yùn)輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；

（2）存活細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

（3）收到細(xì)胞后請(qǐng)拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請(qǐng)及時(shí)拍照與我們聯(lián)系。

細(xì)胞用途：僅供科研使用。

細(xì)胞接受后的處理：

1） 收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查是否漏液，如果漏液，請(qǐng)拍照片發(fā)給我們。

2） 請(qǐng)先在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3） 棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加6ml新的*培養(yǎng)基。

4） 如果細(xì)胞長(zhǎng)滿（90%以上）請(qǐng)及時(shí)進(jìn)行細(xì)胞傳代。

5） 接到細(xì)胞次日，請(qǐng)檢查細(xì)胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請(qǐng)及時(shí)與我們?nèi)〉寐?lián)系。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEMα培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，2.5%；小牛血清，7.5%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注：*次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

下面T25瓶為類；

1，細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2，4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

3，將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

鏡像綺點(diǎn)（上海）細(xì)胞技術(shù)有限公司主要產(chǎn)品和服務(wù)介紹：

        一、原代細(xì)胞服務(wù)：
               各類模式哺乳動(dòng)物的多種原代細(xì)胞資源
               多種人源性正常及腫瘤原代細(xì)胞資源
               原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)相關(guān)試劑、kit、培養(yǎng)基添加劑等
               原代細(xì)胞相關(guān)技術(shù)服務(wù)及整體實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

        二、細(xì)胞系服務(wù)：
               細(xì)胞株/系培養(yǎng)、增殖、凍存和相關(guān)說(shuō)明書
               細(xì)胞系培養(yǎng)過(guò)程的技術(shù)指導(dǎo)
               細(xì)胞系培養(yǎng)基、添加劑、血清及相關(guān)生長(zhǎng)因子、試劑等

        三、iPS細(xì)胞服務(wù)：
               iPS細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)（有滋養(yǎng)層or無(wú)滋養(yǎng)層）
               iPS細(xì)胞增殖及冷凍保存
               iPS基礎(chǔ)培養(yǎng)技術(shù)實(shí)習(xí)
               新藥及實(shí)驗(yàn)儀器上市前評(píng)估

        四、其他技術(shù)外包服務(wù)、客戶定制服務(wù)等

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