本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

人游離膽固醇（FC）ELISA 技術(shù)試劑盒

使用說明書

技術(shù)原理

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被人游離膽固醇（FC）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的技術(shù)抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人游離膽固醇（FC）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時技術(shù)，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

人游離膽固醇（FC）ELISA 技術(shù)試劑盒

操作注意事項

1. 試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 60 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。樣本在使用前也要在室溫平衡 60 分鐘。

2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3. 預(yù)處理后的樣本無需稀釋，直接取 10μL 加樣即可。

4. 嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5. 所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱 96 孔配置 48 孔配置 備注

微孔酶標(biāo)板 12 孔×8 條 12 孔×4 條 無

標(biāo)準(zhǔn)品 0.3mL 0.3mL 無

樣本稀釋液 6mL 3mL 無

技術(shù)抗體-HRP 10mL 5mL 無

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進(jìn)行稀釋

底物 A 6mL 3mL 無

底物 B 6mL 3mL 無終止液 6mL 3mL 無

封板膜 2 張 2 張 無

說明書 1 份 1 份 無

自封袋 1 個 1 個 無

注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：2000、1000、500、250、125、0 μmol/L.

試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。

2. 自動洗板機：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步驟

1. 從室溫平衡 60min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3. 待測樣本孔先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL；

4. 隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的技術(shù)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7. 每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的OD 值。

結(jié)果判斷

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于0.9900。

2. 靈敏度：最di技術(shù)濃度小于 10 μmol/L。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4. 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于 10%、板間變異系數(shù)小于 15%。

5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6 個月

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔(dān)。

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