基因編輯是自 80 年代末發(fā)展起來的一種分子生物學技術。它是一種通過一定的途徑實現(xiàn)人為修改特定基因的技術。早期的基因編輯主要是利用 DNA 同源重組原理,通過設計同源片段替代靶基因片段,從而達到基因編輯的目的。目前應用比較成功的基因敲除技術主要有:Zinc-finger、TALEN、CRISPR/Cas9。

CRISPR(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats)/Cas(CRISPR-Associated)是一種由 RNA 指導的 Cas 核酸酶對靶向基因進行特定 DNA 修飾的技術。它是細菌和古生菌為了應對噬菌體和外源質(zhì)粒的不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制。 CRISPR/Cas 系統(tǒng)可實現(xiàn)高效的基因敲除、敲入、替換及轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。

然而,針對單個堿基突變的基因的修正,傳統(tǒng) CRISPR/Cas 系統(tǒng)的表現(xiàn)卻不盡如人意。由于DNA 雙鏈斷裂時,細胞更傾向于利用非同源末端修復(HENJ)原理對 DNA 進行修復,因而利用同源重組(HDR)進行的單個堿基的替換過程往往十分低效。而單堿基編輯器(BE)系統(tǒng)的出現(xiàn)成功攻克了這一技術壁壘,實現(xiàn)了高效且安全的單個堿基的替換編輯。

BE4 單堿基編輯器是目前前沿的可實現(xiàn)單個堿基精準替換的基因編輯工具,編輯過程中不產(chǎn)生 DSB,僅需一個 DNA 單鏈切口就能實現(xiàn)單堿基精準編輯,可有效避免編輯過程中產(chǎn)生基因組損傷。

BE4 單堿基編輯器通過在傳統(tǒng) CRISPR-Cas9 系統(tǒng)中的 Cas9n(D10A)蛋白上融合胞嘧啶脫氨基酶 APOBEC1 及尿嘧啶糖基化酶抑制劑 UGI,可實現(xiàn)安全、高效、高特異性、高保真性的 C to T 的堿基替換編輯。

技術原理

CRISPR/Cas 系統(tǒng)的工作原理是通過人工優(yōu)化的具有引導作用的單鏈 gRNA(Guide RNA)引導核酸酶 Cas 蛋白在與 gRNA 配對的靶位點處剪切雙鏈 DNA,引起 DNA 雙鏈斷裂(DSB),進而利用生物體內(nèi)非同源末端修復機制(NHEJ)或同源重組機制(HDR)修復 DNA,實現(xiàn)基因的敲除、敲入、替換及轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。

BE4 系統(tǒng)的工作原理是通過人工優(yōu)化的具有引導作用的單鏈 gRNA (Guide RNA)引導核酸酶 Cas 蛋白、胞嘧啶脫氨基酶 APOBEC1 及尿嘧啶糖基化酶抑制劑 UGI 的融合物到達并綁定在與 gRNA 配對的靶位點處,然后利用胞嘧啶脫氨基酶對靶位點出的胞嘧啶 C 進行水解脫氨基作用,將其轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?U,之后再通過細胞自身的 DNA 修復機制將編輯產(chǎn)生的尿嘧啶 U 進一步轉(zhuǎn)換為胸腺嘧啶 T,從而實現(xiàn) C to T 單堿基替換的過程。

產(chǎn)品特點

1. 編輯過程不依賴 DSB 及 donor template,可有效減少編輯過程中產(chǎn)生的基因組損傷。
2. 極低的 Indel 引入率,可顯著降低基因失活幾率。
3. 高度窄縮的基因編輯活性窗口范圍,至多對兩個堿基進行編輯。
4. 極低的脫靶率,可實現(xiàn)高度保真的基因編輯結果。5. *的產(chǎn)物純度,C to T 產(chǎn)物比率 > 80%。
5. 較高的編輯效率,C to T 堿基替換編輯效率高達 50%。

6. 服務說明

7. 您須提供目的基因名稱、ID 號、序列信息,以便設計載體構建方案;
8. 我們將為您提供經(jīng)單堿基編輯后的序列的測序結果驗證。