293T人胚腎細(xì)胞 百歐博偉生物 細(xì)胞系

293T人胚腎細(xì)胞 百歐博偉生物 細(xì)胞系

人胚腎細(xì)胞；293，上皮狀，早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主?？杀磉_(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級(jí)別為2級(jí)。

一、細(xì)胞簡(jiǎn)介

平臺(tái)編號(hào)：bio-72947

規(guī)格：1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

拉丁屬名：293T[HEK-293T]

細(xì)胞名稱：293T（人胚腎細(xì)胞）

種屬：人

年齡（性別）：胎兒

組織來源：腎

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

背景描述：293T細(xì)胞是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基：DMEM高糖(貨號(hào):PM150210)＋10% FBS(貨號(hào):164210-500)＋1% P/S(貨號(hào):PB180120)

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

傳代方法：1:10~1:20傳代，每2~3天換液1次。

傳代情況：P20

應(yīng)用領(lǐng)域：表達(dá)SV40大T抗原，可用于轉(zhuǎn)染和作為包裝細(xì)胞；用于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染時(shí)可高表達(dá)AP融合蛋白。293細(xì)胞是轉(zhuǎn)染腺病毒E1A基因的人腎上皮細(xì)胞系，293T細(xì)胞由293細(xì)胞派生，同時(shí)表達(dá)SV40大T抗原，含有SV40復(fù)制起始點(diǎn)與啟動(dòng)子區(qū)的質(zhì)?？梢詮?fù)制。

二、細(xì)胞培養(yǎng)方法

1、復(fù)蘇細(xì)胞

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2、傳代方法

將舊培養(yǎng)液吸除，PBS清洗兩遍后，加入6mL（/100mm皿），在顯微鏡下觀察，期間禁止搖晃培養(yǎng)皿，細(xì)胞剛有脫落時(shí)，則吸除大部分，留約0.5mL，移至培養(yǎng)箱消化，約2min取出。傳代用12mL CM1-1培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打均勻細(xì)胞，后可分3~6皿培養(yǎng)；

3、生長(zhǎng)條件

37℃，5%CO2，CM1-1培養(yǎng)液。CM1-1培養(yǎng)液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培養(yǎng)液，含丙酮酸鈉。

4、生長(zhǎng)特性

細(xì)胞貼壁不牢，加消化時(shí)，細(xì)胞會(huì)成塊脫落，幾秒就要把多余的吸走，余0.5ml多消化一會(huì)。培養(yǎng)過程中增殖緩慢，細(xì)胞密度大概在70%左右。

5、存儲(chǔ)條件

凍存則用6mL凍存液（90%FBS+10%DMSO）終止消化，吹打均勻，分為6支凍存管，用程序降溫盒于-80℃凍存，過夜轉(zhuǎn)移至液氮中保存。

6、細(xì)胞凍存

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后加入少量，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

三、運(yùn)輸和保存

使用含有優(yōu)質(zhì)胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細(xì)胞。收到細(xì)胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺(tái)棄去上清，加入*使用的培養(yǎng)基后轉(zhuǎn)移至10cm培養(yǎng)皿或者T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

四、細(xì)胞用途：僅供科研使用。

五、注意事項(xiàng)

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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