人丙酮酸脫氫酶PDHE1試劑盒

人丙酮酸脫氫酶PDHE1試劑盒是用于檢測(cè)人體樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 含量或活性的工具，以下從不同方面為你介紹：

常見(jiàn)類型

• ELISA 試劑盒：原理是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合，以及酶對(duì)底物的催化作用來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。如人丙酮酸脫氫酶 E1（PDH E1）ELISA 試劑盒，用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生wu素化的抗體、HRP 標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)che底洗滌后用底物（TMB）顯色，顏色的深淺和樣品中的 PDH E1 呈正相關(guān)，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

• 免疫組化試劑盒：以 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物為基礎(chǔ)，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性抗原。在所用的一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生wu素化二抗與一抗特異性結(jié)合，最后加入 HRP-SA，形成抗原 — 特異一抗 — 生wu素化二抗 —HRP-SA 復(fù)合物，在顯微鏡下觀察成像。

檢測(cè)意義

• 疾病診斷：在某些疾病狀態(tài)下，如丙酮酸脫氫酶缺乏癥、糖尿病、心血管疾病等，丙酮酸脫氫酶 E1 的活性或含量可能會(huì)發(fā)生改變，檢測(cè)其水平有助于疾病的診斷和病情評(píng)估。

• 藥物研發(fā)：在研究與能量代謝相關(guān)的藥物時(shí)，可通過(guò)檢測(cè)丙酮酸脫氫酶 E1 的變化來(lái)評(píng)估藥物的作用機(jī)制和療效。

操作流程

• 樣本采集與處理：根據(jù)試劑盒要求采集合適的樣本，如血清、血漿、細(xì)胞上清液、組織勻漿等。血清采集后，1000×g 離心 15 分鐘分離血紅細(xì)胞；血漿可用 EDTA、檸檬酸鹽、肝素等抗凝劑，采集后 1000×g 離心 60 分鐘去除顆粒；細(xì)胞上清液需 1000×g 離心 32 分鐘去除顆粒和聚合物；組織勻漿則是將組織加入適量生理鹽水搗碎后，1000×g 離心 33 分鐘，取上清液。

• 加樣與孵育：將處理好的樣本或標(biāo)準(zhǔn)品加入到已包被抗體的酶標(biāo)板孔中，在特定溫度（如 37℃）下孵育一定時(shí)間，使樣本中的抗原與包被抗體充分結(jié)合。

• 洗滌：孵育結(jié)束后，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗板多次，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性干擾。

• 加酶標(biāo)抗體與顯色：加入酶標(biāo)抗體，繼續(xù)孵育，使酶標(biāo)抗體與結(jié)合在固相載體上的抗原結(jié)合。然后加入底物溶液，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)。

• 終止反應(yīng)與讀數(shù)：加入終止液終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中丙酮酸脫氫酶 E1 的含量或活性。

注意事項(xiàng)

• 試劑盒保存：一般需在 2-8℃低溫保存，避免反復(fù)凍融，保質(zhì)期通常為 6 個(gè)月左右，使用前應(yīng)檢查試劑盒是否在有效期內(nèi)。

• 樣本質(zhì)量：采集樣本時(shí)要注意避免溶血、脂血等，確保樣本的質(zhì)量。同時(shí)，樣本的處理和保存應(yīng)按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

• 操作規(guī)范：嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，控制好加樣量、孵育時(shí)間、洗滌次數(shù)等關(guān)鍵參數(shù)，避免操作失誤對(duì)結(jié)果造成影響。