alpha-Fetoprotein（AFP）ELISA KIT 

alpha-Fetoprotein（AFP）ELISA KIT 即甲胎蛋白酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒，以下是相關(guān)介紹：

基本信息

• 檢測(cè)目的：用于體外定量測(cè)定人血清、血漿及其他生物學(xué)樣本等中的甲胎蛋白（AFP）含量。

• 檢測(cè)原理：通常采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。以特異性抗 AFP 抗體預(yù)包被在酶標(biāo)板上，加入標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)樣本和酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體，樣本中存在的 AFP 與固相抗體和檢測(cè)抗體結(jié)合，形成 “夾心” 復(fù)合物。洗滌后，加入顯色底物，如 TMB，在酶的催化下顯色，顏色反應(yīng)的深淺與樣本中 AFP 的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng)后，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，從而計(jì)算出樣本中 AFP 的含量。

主要組分

• 包被有抗 AFP 抗體的微孔板：為反應(yīng)提供固相載體，用于捕獲樣本中的 AFP。

• AFP 標(biāo)準(zhǔn)品：一系列已知濃度的 AFP 標(biāo)準(zhǔn)溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，以便對(duì)樣本中的 AFP 進(jìn)行定量分析。

• 酶標(biāo)記的 AFP 檢測(cè)抗體：與 AFP 結(jié)合，用于后續(xù)的顯色反應(yīng)。

• 底物：如 TMB，在酶的作用下發(fā)生顯色反應(yīng)。

• 終止液：用于終止顯色反應(yīng)，使顏色穩(wěn)定，以便進(jìn)行吸光度測(cè)定。

• 洗滌液：用于洗滌微孔板，去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性干擾。

• 其他：如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液、檢測(cè)緩沖液、封板膜等。

操作步驟

• 準(zhǔn)備工作：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，在室溫下平衡 15-30 分鐘。將所需試劑和器材準(zhǔn)備好，包括移液器、酶標(biāo)板、洗板機(jī)、酶標(biāo)儀等，并確保移液器的準(zhǔn)確性。

• 加樣：分別將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本加入到包被有抗 AFP 抗體的微孔板中，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔。一般采用多通道移液器加樣，以保證加樣的準(zhǔn)確性和一致性。加樣后，輕輕振蕩微孔板，使樣品充分混合。

• 孵育：加樣完成后，將微孔板放入恒溫培養(yǎng)箱中，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)規(guī)定的溫度和時(shí)間進(jìn)行孵育，使 AFP 與包被抗體充分結(jié)合。

• 洗滌：孵育結(jié)束后，倒掉微孔板中的液體，用洗滌液進(jìn)行洗滌。通常洗滌 3-5 次，以去除未結(jié)合的物質(zhì)。

• 加檢測(cè)抗體：向微孔板中加入酶標(biāo)記的 AFP 檢測(cè)抗體，然后再次進(jìn)行孵育，使檢測(cè)抗體與結(jié)合在包被抗體上的 AFP 結(jié)合。

• 再次洗滌：同前一步的洗滌操作，以去除未結(jié)合的檢測(cè)抗體。

• 顯色：加入底物 TMB，避光顯色。在酶的催化下，TMB 會(huì)發(fā)生顏色變化，通常從無(wú)色變?yōu)樗{(lán)色。

• 終止反應(yīng)：當(dāng)顯色達(dá)到適當(dāng)?shù)某潭葧r(shí)，加入終止液，使顏色反應(yīng)停止。此時(shí)，藍(lán)色通常會(huì)變?yōu)辄S色。

• 測(cè)定吸光度：用酶標(biāo)儀在規(guī)定的波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的吸光度值。

注意事項(xiàng)

• 試劑盒保存：不同試劑盒保存條件有差異，一般未開(kāi)封試劑盒在 2-8℃或 - 20℃保存，已開(kāi)封的試劑盒各組分按要求分別保存，注意避免反復(fù)凍融。

• 樣本采集與處理：采集血清、血漿等樣本時(shí)要注意避免溶血、脂血等，按照規(guī)范進(jìn)行采集和離心處理。

• 加樣操作：加樣要準(zhǔn)確，避免交叉污染，加樣時(shí)間盡量控制在 5 分鐘內(nèi)，樣本多時(shí)使用排槍加樣。

• 洗滌過(guò)程：洗滌要充分但避免過(guò)度洗滌，防止酶標(biāo)板上的抗原抗體復(fù)合物被洗脫。

• 顯色反應(yīng)：底物要避光保存，顯色時(shí)間和溫度要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，加入終止液后應(yīng)盡快測(cè)定吸光度。

• 結(jié)果判斷：嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。