白介素-6受體（可溶性）ELISA KIT

白介素-6受體（可溶性）ELISA KIT，專為定量檢測生物樣本里可溶性白介素 - 6 受體含量設計，在科研領域對免疫及炎癥研究意義重大。

1. 檢測原理：基于雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定法。酶聯(lián)板預先包被針對可溶性白介素 - 6 受體的特異性抗體。樣本加入后，其中的可溶性白介素 - 6 受體與固相抗體結合。隨后加入酶標記的抗可溶性白介素 - 6 受體抗體，形成 “固相抗體 - 可溶性白介素 - 6 受體 - 酶標抗體” 復合物。經(jīng)洗滌去除未結合物，加入底物溶液（如 TMB），在酶催化下底物顯色，顏色深淺與樣本中該受體含量成正比。通過酶標儀在 450nm 波長測吸光度，與標準曲線對比得出樣本中可溶性白介素 - 6 受體濃度。

2. 試劑盒組成

• 酶聯(lián)板：有 96 孔或 48 孔規(guī)格，預包被抗體，為反應承載物。

• 標準品：通常為凍干品，需用標準品稀釋液復溶并稀釋成系列濃度梯度，如 0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000 pg/mL，用于繪制標準曲線。

• 樣本xi釋液：用于稀釋濃度過高的待測樣本，使樣本濃度適配試劑盒檢測范圍。

• 酶標抗體：即 HRP 標記的抗可溶性白介素 - 6 受體抗體，為濃縮液，需用酶標抗體稀釋液按要求稀釋。

• 酶標抗體稀釋液：專門用于稀釋酶標抗體。

• 底物溶液：如 TMB 底物，與酶標抗體中的 HRP 反應產(chǎn)生顏色變化。

• 洗滌液：一般為濃縮液，按比例用蒸餾水或去離子水稀釋后，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結合物質，降低背景干擾。

• 終止液：多為強酸溶液（如硫酸），用于終止底物顯色反應，穩(wěn)定反應液顏色以便讀數(shù)。

• 封板膜：溫育時覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染。

• 使用說明書：詳細介紹使用方法、注意事項、性能指標等。

3. 樣本要求

• 血清：采集血液后，室溫放置 2 小時或 4℃過夜，1000×g 離心 20 分鐘取上清，采血需用無熱原、無內(nèi)毒素一次性器材。

• 血漿：可用 EDTA、肝素等抗凝，樣本采集后 30 分鐘內(nèi)，2 - 8℃下 1000×g 離心 15 分鐘取上清。

• 細胞培養(yǎng)上清：1000×g 離心 20 分鐘，去除細胞碎片和雜質后取上清檢測。

• 組織勻漿：用預冷 PBS（0.01M，pH = 7.4）沖洗組織，去除殘留血液，剪碎組織后按 1:9（w/v）加 PBS，冰上充分研磨，5000×g 離心 5 - 10 分鐘取上清。

• 樣本采集后若短期內(nèi)檢測，可 4℃保存；長期保存需 - 20℃或 - 80℃凍存，且避免反復凍融，溶血樣本一般不適合檢測。

4. 操作流程

• 準備工作：從冰箱取出試劑盒，平衡至室溫（約 30 分鐘），稀釋濃縮洗滌液。

• 加樣：設空白孔、標準品孔和樣本孔。空白孔加樣本xi釋液，標準品孔加不同濃度標準品，樣本孔加處理好的樣本，每孔加樣量通常 100μL，輕輕混勻，37℃溫育 90 分鐘。

• 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液加滿各孔，浸泡 1 - 2 分鐘后甩干，重復洗滌 5 次，確保洗凈未結合物質。

• 加酶標抗體：每孔加 100μL 稀釋好的酶標抗體工作液，37℃溫育 60 分鐘。

• 再次洗滌：重復上述洗滌步驟。

• 顯色：每孔加 90μL 底物溶液，輕輕混勻，37℃避光顯色 15 - 30 分鐘（依實際顯色情況判斷）。

• 終止反應：每孔加 50μL 終止液，溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色。

• 讀數(shù)：加終止液后 15 分鐘內(nèi)，用酶標儀在 450nm 波長測各孔吸光度（OD 值）。

• 計算結果：以標準品濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標繪制標準曲線。根據(jù)樣本 OD 值從標準曲線查出對應濃度，若樣本稀釋過，需乘以相應稀釋倍數(shù)得實際濃度。

5. 性能指標

• 檢測范圍：常見為 15.6 - 1000 pg/mL 等區(qū)間，滿足多種樣本檢測需求。

• 靈敏度：可低至 7.8 pg/mL 甚至更低，能檢測微量的可溶性白介素 - 6 受體。

• 特異性：對該受體高度特異，與其他細胞因子受體等幾乎無交叉反應。

• 重復性：板內(nèi)變異系數(shù)一般小于 10%，板間變異系數(shù)小于 15%，保障檢測結果穩(wěn)定可靠。