| 供貨周期 |
一個月 |
應用領域 |
化工,生物產業(yè),制藥 |
白介素 8（IL-8），又稱趨化因子 CXCL8，是一種由單核 - 巨噬細胞、上皮細胞等分泌的細胞因子，分子量約 8kd。多種細胞在 LPS、TNF 或 IL-1 刺激下均可產生 IL-8 。IL-8 通過結合趨化因子受體白細胞介素 - 8 受體 α（IL8-Rα，CXCR1）和白細胞介素 - 8 受體 β（IL-8Rβ，CXCR2），對中性粒細胞發(fā)揮趨化和激活作用，參與中性粒細胞介導的組織損傷，調節(jié)炎癥反應 。在自身免疫性疾病、慢性炎癥性疾病等病癥中，IL-8 產生異常，因此定量檢測 IL-8 對于研究疾病發(fā)生發(fā)展及指導治療意義重大 。而白介素 8 受體（可溶性）ELISA KIT 正是用于精準檢測相關樣本中可溶性白介素 8 受體含量的工具 。
該試劑盒主要采用雙抗體夾心兩步法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 。在預包被抗人白介素 - 8 受體（可溶性）抗體（固相抗體）的微孔酶標板中，加入含可溶性白介素 8 受體的校準品和待測樣本，37°C 孵育后，樣本中的可溶性白介素 8 受體與固相抗體特異性結合 。接著加入生wu素標記抗體，再次孵育，使其與已結合在固相抗體上的可溶性白介素 8 受體結合 。經過充分溫育與洗滌，去除未結合物質后，加入 HRP 偶聯(lián)的親和素，其與生wu素標記抗體特異性結合 。至此，在微孔板固相表面形成 “固相抗體 - 抗原 - 生wu素標記抗體 - 親和素酶” 的夾心復合物 。之后加入底物 TMB，在 HRP 酶的催化下，TMB 轉化為藍色，再加入終止液（如硫酸），反應液迅速變?yōu)辄S色 。通過酶標儀在 450nm 波長處測定吸光度（OD 值），吸光度與待測樣品中可溶性白介素 8 受體的濃度呈正相關 。通過擬合校準品曲線，就能準確計算出樣本中可溶性白介素 8 受體的濃度 。
酶聯(lián)板：已預包被抗人白介素 8 受體（可溶性）抗體，一般為 96 孔或 48 孔，用于承載樣本和試劑反應 。
標準品：通常為凍干品，有 2 瓶 。臨用前需用樣品稀釋液溶解并稀釋至特定濃度（如高濃度標準品可能為 1600pg/mL），再進行系列倍比稀釋，得到不同濃度梯度的標準品溶液，如 800pg/mL、400pg/mL、200pg/mL、100pg/mL、50pg/mL、25pg/mL 等，用于繪制標準曲線 。
樣品稀釋液：用于稀釋標準品以及稀釋濃度過高的待測樣本，一般為 1×20mL 裝 。
生wu素標記抗體：與可溶性白介素 8 受體特異性結合，為濃縮液，使用時需用生wu素標記抗體稀釋液按比例稀釋，一般為 1×120μL / 瓶（1：100） 。
生wu素標記抗體稀釋液：1×10mL 裝，用于稀釋生wu素標記抗體 。
HRP 偶聯(lián)的親和素：與生wu素標記抗體結合，形成完整的檢測體系，為濃縮液，使用時需用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液按比例稀釋，一般為 1×120μL / 瓶（1：100） 。
辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液：1×10mL 裝，用于稀釋 HRP 偶聯(lián)的親和素 。
底物溶液（TMB）：1×10mL 裝，與 HRP 發(fā)生顯色反應，在 HRP 催化下 TMB 由無色變?yōu)樗{色 。
濃洗滌液：1×20mL 裝，使用時需用蒸餾水或去離子水按一定比例（如 1：25）稀釋，用于洗滌酶聯(lián)板，去除未結合的物質，降低背景干擾 。
終止液：1×10mL 裝，一般為 2N 的硫酸溶液，用于終止顯色反應，使藍色反應液轉變?yōu)辄S色 。
覆膜：多為 5 張，用于在溫育過程中覆蓋酶聯(lián)板，防止液體蒸發(fā)和外界污染 。
使用說明書：1 份，詳細介紹試劑盒的使用方法、注意事項、性能指標等 。
血清：采集全血后，室溫放置 2 小時或 4°C 過夜，隨后以 1000×g 離心 20 分鐘，小心吸取上清液用于檢測 。收集血液應使用一次性無熱原、無內毒素的試管 。
血漿：可選用乙二胺四乙酸（EDTA）或肝素作為抗凝劑 。標本采集后，需在 30 分鐘內于 2 - 8°C 以 1000×g 離心 15 分鐘，取上清備用 。
組織勻漿：先用預冷的磷酸鹽緩沖液（PBS，0.01M，pH = 7.4）沖洗組織，che底去除殘留血液（因勻漿中裂解的紅細胞會干擾測量） 。稱取適量組織并剪碎，按照約 1：9 的重量體積比（如 1g 組織對應 9mL PBS，可按需調整并記錄），將剪碎組織與 PBS 加入玻璃勻漿器，在冰上充分研磨 。為進一步裂解細胞，可對勻漿液超聲破碎或反復凍融 。最后，將勻漿液以 5000×g 離心 5 - 10 分鐘，取上清用于檢測 。
細胞培養(yǎng)上清：將細胞培養(yǎng)上清以 1000×g 離心 20 分鐘，去除雜質及細胞碎片，取上清即可用于檢測 。
其他生物標本：如腦脊液、腹水等，一般以 1000×g 離心 20 分鐘，取上清進行檢測 。
標本采集后若在 1 周內檢測，可保存于 4°C；若不能及時檢測，需按一次使用量分裝，凍存于 - 20°C（1 個月內檢測）或 - 80°C（6 個月內檢測），且應避免反復凍融，溶血標本不宜用于檢測 。
準備工作：從冰箱取出試劑盒，提前 30 分鐘平衡至室溫，確保所有試劑溫度與室溫一致 。同時，將濃縮洗滌液按要求比例用蒸餾水或去離子水稀釋備用 。
加樣：設置空白孔、標準孔和待測樣品孔 。空白孔加入 100μL 樣品稀釋液；標準孔分別加入不同濃度的標準品溶液 100μL；待測樣品孔加入 100μL 待測樣本 。加樣時，將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，避免產生氣泡，隨后用覆膜蓋住酶聯(lián)板，37°C 溫育 120 分鐘 。
洗滌：溫育結束后，棄去孔內液體，將酶標板倒扣在吸水紙上，輕輕拍干 。每孔加入 350μL 洗滌液，浸泡 1 - 2 分鐘后，甩去洗滌液，再次拍干 。重復洗滌步驟 5 次，確保che底洗去未結合的物質 。
加生wu素標記抗體：每孔加入 100μL 稀釋好的生wu素標記抗體工作液（臨用前配制），覆膜后 37°C 溫育 60 分鐘 。
再次洗滌：溫育完成后，按上述洗滌方法再次洗滌酶聯(lián)板 5 次 。
加 HRP 偶聯(lián)的親和素：每孔加入 100μL 稀釋好的 HRP 偶聯(lián)的親和素工作液，覆膜后 37°C 溫育 60 分鐘 。
第三次洗滌：重復洗滌步驟 5 次 。
顯色：每孔加入 90μL 底物溶液（TMB），輕輕混勻，37°C 避光顯色 。顯色時間一般控制在 30 分鐘內，期間需密切觀察標準品孔的顏色變化，當肉眼可見標準品的前 3 - 4 孔有明顯的梯度藍色，后 3 - 4 孔梯度不明顯時，即可進行下一步 。
終止反應：每孔加入 50μL 終止液，輕輕混勻，此時溶液顏色由藍色立即轉變?yōu)辄S色 。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同，且底物反應時間到后應盡快加入終止液 。
讀數：在加終止液后 15 分鐘內，用酶標儀在 450nm 波長處測量各孔的光密度（OD 值） 。
計算結果：以標準品的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，繪制標準曲線 ?？山柚鷮I(yè)的曲線制作軟件（如 Curve Expert 1.3 或 1.4），根據樣品的 OD 值從標準曲線中查出相應的濃度，再乘以樣品的稀釋倍數，即為樣品中白介素 8 受體（可溶性）的實際濃度 。
檢測范圍：不同試劑盒有所差異，常見檢測范圍為 15.6pg/mL - 1000pg/mL 等 。
靈敏度：通常可低至能檢測出 3pg/mL 甚至更低濃度的可溶性白介素 8 受體 。
特異性：試劑盒對白介素 8 受體（可溶性）具有高度特異性，與其他結構類似物幾乎無交叉反應 。
重復性：板內變異系數（CV）一般小于 10%，板間變異系數小于 15% 。
準確性：通過對已知濃度的可溶性白介素 8 受體標準品多次檢測，測量值與理論值的偏差在合理范圍，一般回收率在 80% - 120% 之間 。
試劑盒從冰箱取出后需平衡至室溫方可使用，使用后應立即按要求保存試劑，避免試劑反復凍融 。
操作過程中應使用一次性吸頭，防止交叉污染 。加樣時，確保吸頭垂直且深入孔底，避免液體掛壁或產生氣泡 。
洗滌是關鍵步驟，洗滌不充分易導致假陽性結果 。若使用自動洗板機，需提前熟練掌握其操作方法，并定期校準 。
底物溶液對光敏感，應避光保存，使用過程中避免長時間暴露于光下 。顯色反應需在 37°C 避光條件下進行，且嚴格控制顯色時間 。
終止液具有腐蝕性，操作時應小心，避免接觸皮膚和眼睛 。若不慎接觸，應立即用大量清水沖洗，并及時就醫(yī) 。
建議所有標準品和樣本均做雙份檢測，以提高檢測結果的準確性和可靠性 。如標本中待測物質含量過高，應先進行稀釋，再重新測定，計算結果時需乘以相應的稀釋倍數 。
不同批次的試劑盒內試劑不能混用，使用前應仔細核對試劑盒的有效期和批次號 。
該試劑盒僅用于科研用途，不得用于臨床診斷 。
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