細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8）

細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8 試劑盒）

產(chǎn)品簡介：CCK-8（Cell Counting Kit-8）試劑檢測細胞活力，可用于細胞增殖和毒性分析，方法簡便而準確。

其基本原理為：該試劑中的 WST-8 與 MTT 類似，在電子載體 1-甲氧基 PMS 的作用下，被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲臜染料（Formazan），甲臜的生成量與活細胞的數(shù)量和活力成正比，因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

操作步驟：1、使用 96 孔板，細胞培養(yǎng)和處理完畢。2、每 100μl 細胞培養(yǎng)液加入 CCK-8 試劑 10μl。3、培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，37℃孵育 1~4 小時。4、于 450nm 處測定 OD 值。5、結(jié)果分析將各測試孔的 OD 值減去對照孔或調(diào)零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均數(shù)。細胞活力％=（加藥細胞 OD-空白 OD）/(對照細胞 OD-空白 OD)×100％6、若使用 96 孔外的培養(yǎng)板，試劑用量等比例增減。

注意事項：1、第一次使用時，建議先做幾個孔摸索條件，考察接種細胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。2、加入試劑速度要快，以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應(yīng)時間不同造成的顯色誤差。有條件的情況下，建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差，CCK-8 試劑可在加樣前用培養(yǎng)基稀釋混勻。3、試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板，使 CCK-8 試劑與培養(yǎng)基充分混勻。4、試劑加入后培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔細胞數(shù)量的多少而異。對于貼壁細胞，加入 CCK-8 的培養(yǎng)時間一般為 1~4 小時，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據(jù)細胞種類而定）。與貼壁細胞相比，懸浮細胞較難顯色。對于懸浮細胞，在加入 CCK-8 培養(yǎng) 1~4 小時后，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測染色程度或用酶標儀測定決定。白細胞較難顯色，因此需要較長的 CCK-8 反應(yīng)時間或增加細胞數(shù)量（~105 個細胞/孔）。若顯色困難，可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定；注意：CCK-8 的最佳反應(yīng)時間以具體顯色的最佳時間為準。5、CCK-8 試劑中的 WST-8 會與還原劑反應(yīng)生成 WST-8 甲臜，如果實驗中有還原劑，需要檢查背景的 OD 值，即在不含細胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內(nèi)檢測，和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較（只加 CCK-8試劑），如果 OD 值明顯偏高，則說明有反應(yīng)。6、若細胞培養(yǎng)時間較長導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入 CCK-8 試劑。含有酚紅的培養(yǎng)基不影響本試劑使用。7、如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，建議設(shè)定 600nm（或 600nm 以上）作為參比波長，扣除參比波長的 OD 值即可。8、如果要測定細胞的具體數(shù)量，需要先做一個標準曲線。9、若測得 OD 值過高，可酌減鋪板細胞數(shù)或 CCK-8 試劑用量。

試劑的優(yōu)點：1、結(jié)果準確，重現(xiàn)性好 試劑不影響細胞活力，顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液，直接測定 OD 值即可， 可準確反應(yīng)細胞活力。2、操作省時簡單 試劑即開即用，無需配制；只需一步操作，即可測定。3、安全性好 不含放射性同位素和有害有機溶劑，使用安全。4、靈敏度高 靈敏度高于 MTT、XTT 和 MTS 等方法。

貯藏條件：在避光 0-5℃的條件下存放一年，測定效果*不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。反復(fù)凍融會增加背景值，經(jīng)常使用時請于 0~5℃條件下保存。本產(chǎn)品僅供科研使用，不做其它用途。

細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8）