極威生物HPLC技術(shù)平臺(tái)項(xiàng)目2022介紹

高效液相色譜（High-performance liquid chromatography, HPLC） 是一種色譜分析技術(shù)，依賴于泵加壓后色譜柱中填充物對(duì)于樣品中各組分吸附力的不同，從而實(shí)現(xiàn)各組分快速的分離。

色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相（stationary phase）發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。

液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相，稱為經(jīng)典液相色譜法，此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)（常有幾個(gè)小時(shí)）。高效液相色譜法（High performance Liquid Chromatography，HPLC）是在經(jīng)典液相色譜法的基礎(chǔ)上，于60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發(fā)展起來(lái)的。

它與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會(huì)引起高阻力，需用高壓輸送流動(dòng)相，故又稱高壓液相色譜法（High Pressure Liquid Chromatography，HPLC）。又因分析速度快而稱為高速液相色譜法（High Speed Liquid Chromatography，HSLP）。也稱現(xiàn)代液相色譜。

HPLC可以實(shí)現(xiàn)絕大部分物質(zhì)的分離鑒定。液相色譜的誕生，源于氣相色譜對(duì)于高沸點(diǎn)有機(jī)物分析，如蛋白質(zhì)、核酸等不易氣化的大分子物質(zhì)的局限性。自1980年代，隨著適用于分離蛋白質(zhì)和其它生物大分子的色譜柱進(jìn)入市場(chǎng)以來(lái)，HPLC開(kāi)拓了它在生物化學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域。HPLC是目前應(yīng)用*的分析技術(shù)，質(zhì)譜作為分離技術(shù)與HPLC競(jìng)爭(zhēng)的同時(shí)又可以在多方面互補(bǔ)使用，如LC-MS。極威技術(shù)平臺(tái)使用高效液相色譜的方法，可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品進(jìn)行鑒定，可高效、精準(zhǔn)的進(jìn)行定量分析。

HPLC分離原理：固定相是固體吸附劑，吸附劑是多孔性微粒物質(zhì)，表面有吸附中心。樣品組分與流動(dòng)相競(jìng)爭(zhēng)吸附中心。各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產(chǎn)生保留時(shí)間不同，從而實(shí)現(xiàn)分離。

極威生物HPLC技術(shù)平臺(tái)項(xiàng)目2022介紹

(1)紫外可見(jiàn)分光技術(shù)器(UVD)。

(2)雙光路雙流路紫外/熒光技術(shù)器(UV/FLD-1)。
(3)蒸發(fā)光散射技術(shù)器(ELSD)。
(4)液相色譜-液相色譜聯(lián)用(HPLC-HPLC)。

高效液相色譜法的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)

HPLC有以下特點(diǎn)：

高壓——壓力可達(dá)150～300Kg/cm 2。色譜柱每米降壓為75Kg/cm 2以上。

高速——流速為0.1～10.0 ml/min。

高效——可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。

高靈敏度——紫外技術(shù)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。

HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：

速度快——通常分析一個(gè)樣品在15～30min，有些樣品甚至在5min內(nèi)即可完成。

分辨率高——可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到最佳分離效果。

靈敏度高——紫外技術(shù)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)技術(shù)器可達(dá)0.1pg。

柱子可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。

樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

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