10153ES60 Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 Yeasen/翌圣生物
- 型號 10153ES60
- 產地 上海
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2024/9/4 17:29:42
- 訪問次數 569
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供貨周期 | 現貨 | 規(guī)格 | 100 u |
---|---|---|---|
貨號 | 10153ES60 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規(guī)格 | 價格(元) |
Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶 | 10153ES10 | 10 U | 115.00 |
10153ES60 | 100 U | 695.00 | |
10153ES76 | 500 U | 2,585.00 | |
10153ES80 | 1000 U | 4,785.00 |
產品描述
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,經基因工程改造而成。該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常溫可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的兩種單克隆抗體,可簡便地進行高特異性的Hot Start PCR,極大提高了擴增的檢出率和產物的特異性。酶溶液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力,擴增目的片段的長度可長達13 kb。本產品配備了優(yōu)化緩沖液,使得該酶適用于復雜模板的擴增。擴增產物為平末端。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品規(guī)格 | |||
10153ES10 (10 U) | 10153ES60 (100 U) | 10153ES76 (500 U) | 10153ES80 (1000 U) | ||
10153-A | Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) | 10 μL | 100 μL | 500 μL | 500 μL×2 |
10153-B | 2×Canace® Plus PCR buffer(含Mg2+,dNTPs) | 300 μL | 3×1 mL | 15×1 mL | 30×1 mL |
10153-C | 6×DNA Loading Buffer | 120 μL | 1.2 mL | 6 ml | 12 ml |
產品應用
基因克??;復雜DNA模板擴增;高通量建庫。
活性定義
用活性化的大馬哈魚DNA為模板/引物,74°C,30 min內,攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1 U。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20°C保存。有效期1年。
注意事項
1)為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
2)本產品僅作科研用途!
推薦PCR反應體系
組分 | 體積 | 終濃度 |
ddH2O | to 50 μL | - |
2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+,dNTPs) | 25 μL | 1× |
DNA模板 | 適量 | - |
2 μL | 0.4 μM | |
Primer反向 (10 μM) | 2 μL | 0.4 μM |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) | 1 μL | 1 U/50 μL |
【注】:
1)試劑使用:使用前要充分解凍混勻。
2)Mg2+終濃度:體系終濃度為2mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM為間隔向上摸索。
3)高GC模板:在體系中加入終濃度為3%的DMSO可能有利于擴增。
4)不同模板的推薦使用量(25 μL反應體系):
模板種類 | 擴增片段1 kb-10 kb |
基因組DNA | 50 ng-200 ng |
質粒或病毒DNA | 10 pg-20 ng |
cDNA | 1-2.5 μL(不超過PCR反應總體積的1/10) |
PCR擴增程序:有以下三種程序可選擇,優(yōu)先選擇兩步法程序。
兩步法程序(優(yōu)先推薦): 三步法程序(常規(guī)程序):
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 | 循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 | |
預變性 | 98°C | 3 min | 1 | 預變性a | 98°C | 3 min | 1 | |
變性 | 98°C | 10 sec | 30-35 | 變性 | 98°C | 10 sec | 30-35 | |
延伸 | 68°C | 30 sec/kb | 退火b | 60°C | 20 sec | |||
終延伸 | 72°C | 5 min | 1 | 延伸c | 72°C | 30 sec/kb | ||
終延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
梯度溫度退火程序(難擴增基因推薦程序): *不同擴增程序下的特點:
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 | 程序類型 | 兩步法 | 三步法 | 梯度退火 | |
預變性 | 98°C | 3 min | 1 | 速度 | 最快 | 中等 | 慢 | |
變性 | 98°C | 10 sec | 15,每個循環(huán)降低1℃ | 特異性 | 高 | 中等 | 高 | |
梯度退火 | 70-55°C | 20 sec | PCR產量 | 中等 | 最高 | 中等 | ||
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | 檢出率 | 高 | 中等 | 高 | ||
變性 | 98°C | 10 sec | 20 | |||||
正常退火 | 55°C | 20 sec | ||||||
延伸 | 72°C | 30 sec/kb | ||||||
終延伸 | 72°C | 5 min | 1 |
【注】:
a. 預變性溫度和時間:推薦溫度:98°C,時間:3 min,高GC含量模板5-10 min。
b. 退火溫度和時間:推薦溫度:60°C,也可根據需要,設立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設置為20 sec,可以在10-30 sec內調節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
c. 延伸溫度和時間:推薦溫度:72°C。時間:30 sec/kb,復雜模板根據實際情況可延長至60 sec/kb。
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