DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B離子交換填料

DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B是將二乙胺基乙基鍵合在瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)，具有優(yōu)異的流動(dòng)性能，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

1 理化指標(biāo)

*檢測(cè)條件： 層析柱16mm×100mm  *柱床高5cm，25℃，流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。

2 貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20% 乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方，不能冷凍。用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

3 應(yīng)用

本產(chǎn)品具有高化學(xué)穩(wěn)定性、高流速、高載量、好的機(jī)械性能、可在位清洗、多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，非特異性吸附低，回收率高，適用于工業(yè)規(guī)模生產(chǎn)，適用于在pH工作范圍內(nèi)可形成負(fù)離子的生物大分子的分離純化，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。

4 使用方法

4.1 裝柱

（1）讓所有的材料和試劑均平衡至層析實(shí)驗(yàn)的溫度。配制緩沖液，對(duì)所有的緩沖液進(jìn)行脫氣處理。

（2）檢查層析柱所有部件，特別是過濾網(wǎng)，密封圈，螺旋塞是否緊密，玻璃管是否干凈和完整。

（3）根據(jù)需要量取相應(yīng)量的凝膠，用去離子水清洗掉20%乙醇。

（4）將柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位，務(wù)必使底端無氣泡。

（5）用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（6）打開蠕動(dòng)泵，讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定（注意壓力不要超過填料最大耐壓）。

4.2 平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡液是低濃度的緩沖溶液，如Tris 、PBS等。

4.3 上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。鹽濃度太大的樣品處理后再上樣。

（2）一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。

（3）介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的帶電性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和pH值。推薦的操作pH應(yīng)在緩沖液pKa的0.5個(gè)單位內(nèi)，并且和目標(biāo)分子的等電點(diǎn)（pI）相差至少一個(gè)pH單位。

Buffers for anion exchange chromatography

4.4 洗脫

DEAE介質(zhì)可用增大鹽濃度或減小pH值進(jìn)行洗脫，常用增大鹽濃度的辦法洗脫。

4.5 再生

一般用高鹽濃度的緩沖液（含1~2mol/L NaCl）洗或減小pH洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

4.6 在位清洗

（1）對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用0.1M NaOH 去除。清洗完畢后，用至少10倍緩沖液平衡柱子。

4.7 注意

在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，要避免柱子流干，氣泡進(jìn)入。

5 保存

使用完的填料，用純水*沖洗，最后保存在4℃（保存溶液為20%乙醇），不能冷凍。

6 注意事項(xiàng)

（1）上樣之前，樣品必須經(jīng)過膜過濾及去除色素，否則雜質(zhì)及色素會(huì)被吸附到填料上，影響填料的正常使用。所有的緩沖液均需要用0.45um的過濾器過濾。

    （2）在使用過程中，避免使用高濃度的強(qiáng)酸強(qiáng)堿，酸和堿的濃度應(yīng)低于0.1摩爾。堿會(huì)使流速變慢。

    （3）不同的樣品，吸附和洗脫方法不相同，可以根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)進(jìn)行。

（4）離子交換介質(zhì)在選擇層析柱時(shí)，避免使用細(xì)長(zhǎng)柱，會(huì)增加實(shí)驗(yàn)操作壓力。

DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B離子交換填料

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