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石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

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  研謹(jǐn)生物依托自身成熟高效的技術(shù)服務(wù)平臺、專業(yè)的技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊,可以按您的課題資料提供科學(xué)完善的實驗設(shè)計方案、客觀真實的實驗結(jié)果、完整詳實的實驗結(jié)果報告單。如果您受時間、 試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎.您與我們聯(lián)系。“方便、 準(zhǔn)確、快捷是我們的宗旨,我們將用-流的服務(wù)為您解決實驗中的問題!希望我們能成為您值得信賴的科研合作伙伴。
 
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  未來公司也將一如既往地,以更好的產(chǎn)品、更高的質(zhì)量、更優(yōu)的服務(wù)回饋每一個客戶。研謹(jǐn)期待與您的合作!
 

wb代做,蛋白雙向(2-D)電泳,半定量RT-PCR,PKC活性檢測,明膠酶譜MMP,免疫共沉淀,流式多因子檢測,CCK8代做

應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
  TUNEL凋亡顯色法
 
  TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時,DNA內(nèi)切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上帶有生物素(Biotin) 標(biāo)記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的streptavidin結(jié)合, 在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過普通光學(xué)顯微鏡檢測到細(xì)胞凋亡。
 
  實驗意義
 
  1. TUNEL法是一種分子生物學(xué) 與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,可對完整的單個凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色,可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。
 
  2.石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測,靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高。
 
  3.操作簡便快捷,在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。
 
  實驗步驟
 
  1.石蠟切片TUNEL顯色法:
 
 ?、偈炃衅R?guī)脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;
 
 ?、赑BS漂洗3*5 min; .
 
  ③加入蛋白酶K工作液37°C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、?%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、藜尤脒m量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .
 
 ?、呓?.3% H202封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、嗟渭覵treptavidin-HRP工作液,37*C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、岬渭覦AB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;
 
  10.選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
 
  脫水、透明、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。
 
  2.冰凍切片TUNEL顯色法:
 
 ?、傩迈r組織經(jīng)處理后,立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片,厚度為5~6 um;
 
 ?、诜烂摬F?,貼片,室溫陰干約12 h;
 
 ?、?%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、芙敕忾]液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、萁脒兺敢?0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;
 
 ?、藜尤脒m量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .
 
 ?、呓?.3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、嗟渭覵treptavidin-HRP工作液,379C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、岬渭覦AB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:
 
  @選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
 
  脫水、透明、中性樹膠封片后進(jìn)行觀察。
 
結(jié)果展示.png
石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實驗完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
 
  1.實驗周期: 1-2周
 
  2.交付標(biāo)準(zhǔn):蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)
 
  需確認(rèn)的信息
 
  1.樣本的種屬.
 
  2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)
 
  3.是否提供試劑盒
 
  4.拍照要求
 
  收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)周期提供結(jié)果:
 
  歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
 
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