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石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

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應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè)
  TUNEL凋亡顯色法
 
  TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),DNA內(nèi)切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上帶有生物素(Biotin) 標(biāo)記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過(guò)氧化物酶 (HRP) 標(biāo)記的streptavidin結(jié)合, 在HRP的催化下通過(guò)DAB顯色來(lái)顯示凋亡細(xì)胞,從而可以通過(guò)普通光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到細(xì)胞凋亡。
 
  實(shí)驗(yàn)意義
 
  1. TUNEL法是一種分子生物學(xué) 與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,可對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色,可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。
 
  2.石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè),靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高。
 
  3.操作簡(jiǎn)便快捷,在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。
 
  實(shí)驗(yàn)步驟
 
  1.石蠟切片TUNEL顯色法:
 
  ①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;
 
 ?、赑BS漂洗3*5 min; .
 
 ?、奂尤氲鞍酌窴工作液37°C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、?%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、萁敕忾]液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、藜尤脒m量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .
 
 ?、呓?.3% H202封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、岬渭覦AB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;
 
  10.選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
 
  脫水、透明、中性樹(shù)膠封片后進(jìn)行觀察。
 
  2.冰凍切片TUNEL顯色法:
 
 ?、傩迈r組織經(jīng)處理后,立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片,厚度為5~6 um;
 
 ?、诜烂摬F?,貼片,室溫陰干約12 h;
 
 ?、?%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
  ④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、萁脒兺敢?0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;
 
  ⑥加入適量TdT酶反應(yīng)液,暗濕盒中37°C反應(yīng)1 h,用SSC室溫15 min終止反應(yīng)后,PBS漂洗3x5 min; .
 
 ?、呓?.3% H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、嗟渭覵treptavidin-HRP工作液,379C反應(yīng)30-60 min, PBS漂洗3x5 min;
 
 ?、岬渭覦AB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:
 
  @選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
 
  脫水、透明、中性樹(shù)膠封片后進(jìn)行觀察。
 
結(jié)果展示.png
石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
 
  1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周
 
  2.交付標(biāo)準(zhǔn):蠟塊、切片、染色圖片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、耗材等)
 
  需確認(rèn)的信息
 
  1.樣本的種屬.
 
  2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)
 
  3.是否提供試劑盒
 
  4.拍照要求
 
  收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)周期提供結(jié)果:
 
  歡迎咨詢?cè)斦?,我們?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。
 
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