細(xì)胞Hochest凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介:

Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激發(fā)。都在461nm處發(fā)出藍(lán)靛色熒光光。Hoechst染色時(shí)無(wú)需用DAB來(lái)顯色，它直接結(jié)合細(xì)胞的DNA，經(jīng)過(guò)紫外光激發(fā)后發(fā)出藍(lán)色熒光。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:

Hoechst是可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低。熒光染料Hoechst能少許進(jìn)入正常細(xì)胞膜，使其染上低藍(lán)色，而凋亡細(xì)胞的膜通透性增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst比正常細(xì)胞的多，熒光強(qiáng)度要比正常細(xì)胞中要高，此外，凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合，并且凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細(xì)胞的藍(lán)色熒光增強(qiáng)。

]實(shí)驗(yàn)操作流程:

1、可貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)于含有蓋玻片的培養(yǎng)皿中或?qū)⒎琴N壁細(xì)胞懸浮培養(yǎng);

2、將HOECHST加入培養(yǎng)皿終濃度為10ug/ml,37°C孵育30min;

3、加入4%PF與培養(yǎng)液1:3混合，固定細(xì)胞5-10min;

4、固定后將長(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片用封片劑封于載玻片;

5、熒光顯微鏡下觀察。

客戶提供:

1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存，組織不少于100mg;

2、培養(yǎng)細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2x106個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融) ;

3、血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5m生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，保存(-80°C可長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融) ;

4、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管，保存(49C可保存15-20天，-80°C可長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融) ;

5、石蠟切片,冰凍切片以及細(xì)胞爬片，涂片等。

6、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本

組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后，加冰袋寄送;

細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(送視路程遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá))。

交付標(biāo)準(zhǔn):

1、圖片;

2、完整項(xiàng)目報(bào)告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)。

其他:

1、Hoechst能與DNA結(jié)合，干擾DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂，因此有致畸和致癌危險(xiǎn)。使用和廢棄需謹(jǐn)慎。

2、對(duì)于貼壁細(xì)胞或組織切片,加入少量Hoechst 染色液，覆蓋住樣品即可。對(duì)于懸浮細(xì)胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3- 5分鐘。

3、熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。