細胞Hochest凋亡染色實驗服務(wù)

實驗技術(shù)簡介:

Hoechst染料都可在350nm左右的紫外光激發(fā)。都在461nm處發(fā)出藍靛色熒光光。Hoechst染色時無需用DAB來顯色，它直接結(jié)合細胞的DNA，經(jīng)過紫外光激發(fā)后發(fā)出藍色熒光。

實驗技術(shù)原理:

Hoechst是可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。熒光染料Hoechst能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入凋亡細胞中的Hoechst比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst排出到細胞外使之在細胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。

]實驗操作流程:

1、可貼壁細胞生長于含有蓋玻片的培養(yǎng)皿中或?qū)⒎琴N壁細胞懸浮培養(yǎng);

2、將HOECHST加入培養(yǎng)皿終濃度為10ug/ml,37°C孵育30min;

3、加入4%PF與培養(yǎng)液1:3混合，固定細胞5-10min;

4、固定后將長有細胞的蓋玻片用封片劑封于載玻片;

5、熒光顯微鏡下觀察。

客戶提供:

1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存，組織不少于100mg;

2、培養(yǎng)細胞:通過細胞計數(shù)取不少于2x106個細胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護劑，混勻后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融) ;

3、血液細胞標本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細胞分離液分離細胞后加入0.5m生理鹽水或蛋白保護劑，保存(-80°C可長期保存,避免反復(fù)凍融) ;

4、血清或細胞培養(yǎng)液標本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管，保存(49C可保存15-20天，-80°C可長期保存,避免反復(fù)凍融) ;

5、石蠟切片,冰凍切片以及細胞爬片，涂片等。

6、樣本運輸:可選擇以下任何一種方式寄送標本

組織樣本、細胞樣本以干冰運輸或加入蛋白保護劑后，加冰袋寄送;

細胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(送視路程遠近2-3天可到達)。

交付標準:

1、圖片;

2、完整項目報告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)。

其他:

1、Hoechst能與DNA結(jié)合，干擾DNA復(fù)制和細胞分裂，因此有致畸和致癌危險。使用和廢棄需謹慎。

2、對于貼壁細胞或組織切片,加入少量Hoechst 染色液，覆蓋住樣品即可。對于懸浮細胞，至少加入待染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3- 5分鐘。

3、熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，染色后的樣品宜避光保存。