食管癌3D類(lèi)器官培養(yǎng)基產(chǎn)品說(shuō)明：食管癌類(lèi)器官培養(yǎng)基（ESophaqus Carcinoma Organoid Medium）是一種為促進(jìn)食管鱗癌類(lèi)器官體外形成和擴(kuò)增而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基的*配方可以提供一個(gè)較適合的食管鱗癌類(lèi)器官擴(kuò)增所需營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人食管鱗癌類(lèi)器官的生長(zhǎng)。

食管癌3D類(lèi)器官培養(yǎng)基產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤特征

(4) 藥敏結(jié)果與臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明：
?  實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
（1）消化好的食管癌原代細(xì)胞懸液。
（2）15mL無(wú)菌離心管、1.5mL離心管、24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30 min。
（3）提前30min從4℃冰箱取出食管癌類(lèi)器官培養(yǎng)基平衡至室溫，提前從-20℃冰箱取出所需體積的基質(zhì)膠冰上融化。
?  食管癌類(lèi)器官培養(yǎng)
（1）將消化好的食管癌細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)，按照1-2萬(wàn)細(xì)胞每孔計(jì)算所需的細(xì)胞數(shù)，根據(jù)計(jì)算好的體積吸取細(xì)胞懸液加入預(yù)冷的1.5mL離心管中，補(bǔ)齊預(yù)冷的DMEM/F12至所需體積。
（2）將預(yù)冷后的細(xì)胞懸液加入等體積的基質(zhì)膠中輕輕混勻（全程冰上操作），然后將細(xì)胞與基質(zhì)膠的混合液按照40μL/孔接種于24孔板。
（3）將接種好的培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱至少30min，待基質(zhì)膠*凝固，然后沿24孔壁每孔緩慢加入500μL預(yù)先恢復(fù)至室溫的類(lèi)器官培養(yǎng)基，3天后鏡下觀察類(lèi)器官形成情況，粒徑大于50μm即認(rèn)為類(lèi)器官已經(jīng)形成。
（4）每5天更換一次培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，持續(xù)觀察類(lèi)器官大小，鏡下觀察大部分類(lèi)器官大小均大于50μm且大小不再增大即可收集類(lèi)器官進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
?  食管癌類(lèi)器官收集
（1）吸去培養(yǎng)基，每孔加入200μL基質(zhì)膠解離試劑，輕輕吹打混勻，收集至15mL離心管中。
（2）37℃解離30min（具體解離時(shí)間根據(jù)實(shí)際情況決定，以無(wú)明顯大塊膠狀物為準(zhǔn)），解離之后1500rpm離心3min，輕輕吸去上清，待用。
?  食管癌類(lèi)器官傳代
（1）解離之后的細(xì)胞加入適量的消化酶，37℃，200rpm消化（具體時(shí)間根據(jù)類(lèi)器官大小和數(shù)量決定，以無(wú)肉眼可見(jiàn)顆粒為準(zhǔn)）。
（2）消化*后1500rpm離心3min，輕輕吸去上清，使用終止培養(yǎng)基重懸后1500rpm離心3min，加入預(yù)冷的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行重懸，計(jì)數(shù)，按照培養(yǎng)步驟操作繼續(xù)培養(yǎng)。
注意事項(xiàng)：
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。
3.為保持本產(chǎn)品的最佳使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。4.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
5.樣本需為食管鱗癌術(shù)中樣本，且腫瘤細(xì)胞比例越高（至少>50%），培養(yǎng)成功率越高，不推薦用于少量樣本（如內(nèi)鏡或者循環(huán)腫瘤細(xì)胞）的培養(yǎng)。
6.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。