動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒主要用途：動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑是一種旨在從動(dòng)物細(xì)胞或組織中分離出活性完整而高度純化的線粒體細(xì)胞器的權(quán)wei而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。適合于動(dòng)物軟組織（肝或腦組織）和培養(yǎng)細(xì)胞的活性線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，活性保證，純度可達(dá)99％?？梢员挥糜诰€粒體酶活性、細(xì)胞凋亡、信號(hào)傳遞、能量代謝、蛋白組學(xué)和病理生理學(xué)等的研究。產(chǎn)品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到即用，性能穩(wěn)定，分離產(chǎn)量和純度堪稱同類產(chǎn)品最佳。

動(dòng)物細(xì)胞/組織高質(zhì)純化線粒體分離試劑盒技術(shù)背景:線粒體細(xì)胞器的分離是現(xiàn)代細(xì)胞生物學(xué)研究的zui常用的手段之一。從任何組織或細(xì)胞分離線粒體的技術(shù)方法基本上采用：第一，通過(guò)機(jī)械或化學(xué)方法破裂細(xì)胞；第二，通過(guò)低速差速離心去除殘?jiān)樾己途薮蠹?xì)胞器；第三，通過(guò)高速差速離心獲得線粒體；甚至，第四，可以通過(guò)等密度離心獲得純度更高的線粒體。 

產(chǎn)品內(nèi)容

清理液（Reagent A）          毫升

裂解液（Reagent B）          毫升

凈化液（Reagent C）          毫升

強(qiáng)化液（Reagent D）          毫升

保存液（Reagent E）          毫升

活性液（Reagent F）          微升

高純液（Reagent G）          毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書              1份

保存方式

保存凈化液（Reagent C）和活性液（Reagent F）在－20℃冰箱里，避免反復(fù)凍融；其余的保存在4℃冰箱里；高純液（Reagent G），避免光照；裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）嚴(yán)格無(wú)菌操作；有效保證6月

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（G&VS12028）或PBS緩沖溶液（G&VS12033）：用于清理細(xì)胞

硬組織處理液（Reagent G）：用于促進(jìn)硬組織表面溶解

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于細(xì)胞脫離

*細(xì)胞培養(yǎng)液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的細(xì)胞培養(yǎng)基

15毫升錐形離心管：用于線粒體初步制備物的存放

50毫升錐形離心管：用于細(xì)胞或組織收集后離心或清洗

1.5毫升離心管：用于保存線粒體

4℃臺(tái)式離心機(jī)：用于沉淀細(xì)胞

4℃超速離心機(jī)：用于分離細(xì)胞器成分和高質(zhì)純化

DOUNCE勻漿器：用于裂解細(xì)胞

實(shí)驗(yàn)步驟

一、動(dòng)物軟組織線粒體分離（組織勻漿法）

實(shí)驗(yàn)開始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）和活性液（Reagent F）凍融，然后移取xx微升活性液（Reagent F）、 xx 凈化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標(biāo)記為裂解工作液，放進(jìn)冰槽里備用。然后進(jìn)行下列操作。

1． 手術(shù)取出動(dòng)物組織，并秤重以確定組織重量（注意：實(shí)驗(yàn)前最好使動(dòng)物空腹12至24小時(shí)） 

2． （選擇步驟）放進(jìn)預(yù)冷的50毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入適量的（1克組織需要xx毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

4． 即刻用刀片切碎組織

5． 放進(jìn)一個(gè)預(yù)冷的15毫升錐形離心管

6． 加入預(yù)冷的xx毫升裂解工作液

7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

8． 即刻放入預(yù)冷的DOUNCE勻漿器

9． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見注意事項(xiàng)6）

10． 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管

11． 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1500g

12． 小心移出上清液到另一個(gè)新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細(xì)胞核和未溶解的細(xì)胞

13． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g

14． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得線粒體沉淀物

15． 加入xx微升保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒

16． 放進(jìn)－70℃冰箱里備用或放進(jìn)冰槽里繼續(xù)后續(xù)操作

17． 移取xx毫升的高純液（Reagent G）到6毫升超速離心管（注意：使用前搖勻高純液(Reagent G)）

18． 輕輕加入xx微升線粒體混勻液在高純液（Reagent G）的上面，避免震動(dòng)

19． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心45分鐘，速度為40000g

20． 小心取出超速離心管：可見下端棕色或乳黃色樣品帶（注意：在其上端可能有溶酶體樣品帶） 

21． 小心抽去線粒體樣品帶以上的液體

22． 小心收集線粒體樣品帶到2毫升離心管（注意：用3毫升針筒和18號(hào)針頭，置于樣品帶下緣小心緩慢抽吸）——此步驟獲得高純線粒體樣品

23． 加入xx至xx毫升保存液（Reagent E）

24． 放進(jìn)4℃超速離心機(jī)離心10分鐘，速度為10000g

25． 小心抽去上清液

26． （選擇步驟）重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟23至25一次

27． 加入xx微升保存液（Reagent E），混勻

28． 即刻移入到預(yù)冷的1.5毫升離心管

29． 放進(jìn)－70℃冰箱里保存

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應(yīng)用領(lǐng)域：

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