大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞 百歐博偉生物 原代細(xì)胞

大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞 百歐博偉生物 原代細(xì)胞

一、基本信息

平臺(tái)編號(hào)：bio-73730

產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

產(chǎn)品名稱：大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞

組織來源：腦組織

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

二、細(xì)胞簡(jiǎn)介

大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞分離自腦皮層組織；皮層神經(jīng)元細(xì)胞是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突觸（軸突）的細(xì)胞，它由細(xì)胞體和細(xì)胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經(jīng)纖維，它的末端的細(xì)小分支叫做神經(jīng)末梢。細(xì)胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中，細(xì)胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細(xì)胞體是細(xì)胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細(xì)胞，染色質(zhì)少，核仁明顯。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì)，還有許多神經(jīng)元纖維。細(xì)胞突起是由細(xì)胞體延伸出來的細(xì)長部分，又可分為樹突和軸突。每個(gè)神經(jīng)元可以有一或多個(gè)樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細(xì)胞體。每個(gè)神經(jīng)元只有一個(gè)軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個(gè)神經(jīng)元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質(zhì)神經(jīng)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細(xì)胞之一，是大腦進(jìn)行功能活動(dòng)調(diào)節(jié)的基本單位，參與動(dòng)物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。通過形態(tài)學(xué)觀察顯示神經(jīng)元從貼壁、伸出突起開始；突起逐漸增多，而后突起進(jìn)一步增多并逐漸成網(wǎng)，同時(shí)細(xì)胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細(xì)胞豐滿，隨后神經(jīng)元開始裂解，突起逐漸減少，細(xì)胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細(xì)胞變形。 本公司生產(chǎn)的大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞采用消化法結(jié)合神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)MAP-2免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

三、培養(yǎng)基信息

Neurobasal-A、B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等。我們推薦使用大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞專用培養(yǎng)基（產(chǎn)品貨號(hào)：CM-R105）作為體外培養(yǎng)大鼠皮層神經(jīng)元細(xì)胞的培養(yǎng)基。

四、液體配制

硼酸硼砂緩沖液：0.05M四硼化鈉45ml，0.2M硼酸55ml，pH8.4；

－EDTA消化液：－0.125g；EDTA－0.2g；D-Hanks平衡鹽液定容至100ml

所用的培養(yǎng)板、培養(yǎng)瓶或玻片預(yù)先經(jīng)100μg/L多聚賴氨酸硼酸鹽緩沖液于37℃包被4h，三蒸水洗三遍晾干備用。

五、操作步驟如下

1、孕16d SD大鼠經(jīng)麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮膚，依次剪開皮膚、肌肉、皮下筋膜，無菌操作下取出胚胎放入預(yù)冷的D-Hanks平衡鹽液中。

2、在解剖顯微鏡下分離并取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織成約1mm3大小，加入-EDTA消化液并放入37℃孵箱內(nèi)消化20min，中間搖晃一次。

3、隨后用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的培養(yǎng)液（DMEM＋10％FBS）的離心管內(nèi)終止消化液作用5min。

4、用滴管吸出組織轉(zhuǎn)移到裝有預(yù)冷的DMEM＋10％FBS的離心管內(nèi)，用火焰拋光的巴斯德滴管吹打數(shù)次，靜置后取上清吸到另一支離心管內(nèi)。重復(fù)上述步驟2～3次。

5、將所收集的上清經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾。

6、過濾后的細(xì)胞懸液于800r/min離心5min，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液（DMEM＋20％FBS）并吹打成單細(xì)胞懸液。

7、細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度按1.5×105/cm2種入6孔板內(nèi)，放入CO2孵箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)48h后換液并加入Ara-C使其終濃度為1×10-5mM/L。Ara-C作用24h后全量換液。以后每隔3天半量換液一次。

六、注意以下幾點(diǎn)

1、上面的步驟是傳統(tǒng)方法。有許多地方可以進(jìn)行改動(dòng)：如消化時(shí)可以直接用0.125－0.25的消化15－20min左右，也可用DNA酶進(jìn)行消化，有人還直接進(jìn)行吹打，都可行。

2、上面雖然時(shí)大鼠皮層神經(jīng)元，但是同樣適用于小鼠，但是應(yīng)該選擇 孕13d 左右的小鼠。

3、神經(jīng)元是一種比較難培養(yǎng)的細(xì)胞，因此在接種時(shí)細(xì)胞的密度一定要夠！

4、在玻片上培養(yǎng)神經(jīng)元時(shí)，一定要注意玻片的來源和處理方法，這個(gè)非常重要，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的影響是很大的。如果您現(xiàn)在在玻片上培養(yǎng)的神經(jīng)元生長情況還不錯(cuò)的話，那么您在以后的培養(yǎng)中還是用同一來源（廠家）的玻片。

5、如果有B27和neurobasal培養(yǎng)基，那么就方便了（不用加AraC）--

（1）把細(xì)胞懸液用（DMEM＋20％FBS）懸浮，種到培養(yǎng)皿上6－12h后，全量換成2％B27的neurobasal培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，3d半量換液。

（2）把細(xì)胞懸液用直接用2％B27的neurobasal培養(yǎng)基懸浮接種。

（3）可以用新生1d內(nèi)的胎鼠皮層直接培養(yǎng)。

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