MARCKS相關(guān)蛋白(MARCKSL1)重組蛋白
- 公司名稱 上海研生實(shí)業(yè)有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào)
- 產(chǎn)地 國(guó)產(chǎn)
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2023/3/29 15:14:52
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 英文名稱 | Recombinant?MARCKS?Related?Protein?(MARCKSL1)MLP1 | 物種 | Homo?sapiens?(Human，人) |
| 來源 | 原核表達(dá) | 應(yīng)用 | Positive?Control;?Immunogen;?SDS-PAGE;?WB |
公司產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于臨床！
產(chǎn)品名稱：MARCKS相關(guān)蛋白(MARCKSL1)重組蛋白
物種：Homo sapiens (Human，人)
英文名稱：Recombinant MARCKS Related Protein (MARCKSL1)MLP1; MRP; MLP; F52; MACMARCKS; MARCKS-like protein 1; Macrophage myristoylated alanine-rich C kinase substrate
酶與激酶
物種：Homo sapiens (Human，人) 來源：原核表達(dá) 宿主E.coli 內(nèi)毒素水平：<1.0EU per 1μg 亞細(xì)胞定位：：n/a 預(yù)測(cè)分子量：45.8kDa 實(shí)際分子量：45.8kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)片段與標(biāo)簽：His33~Ala189 with N-terminal His and GST Tag 緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300） 性狀：凍干粉 純度：> 95% 等電點(diǎn)：4.7 應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 規(guī)格10μg50μg 200μg 1mg 5mg |
樣品要求：
1、待標(biāo)記樣品需保證90%以上的純度，樣品中不含有干擾標(biāo)記物結(jié)合的成分，如有特殊成分，請(qǐng)?zhí)崆皹?biāo)注說明。
2、待標(biāo)記樣品最小標(biāo)記量為1mg，最好是干粉，如果是液體，濃度應(yīng)大于1mg/ml。
3、抗體IgG樣品中應(yīng)不含BSA、疊氮鈉成分。
4、大分子蛋白應(yīng)提供分子量、等電點(diǎn)、緩沖液成分及pH等信息；小分子多肽需提供氨基酸序列；小分子化合物還需提供分子結(jié)構(gòu)式。
5、請(qǐng)?zhí)崆罢f明任何特殊情況。
相關(guān)產(chǎn)品：
基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP13)重組蛋白物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)
基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)
基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP2)重組蛋白物種：Oryctolagus cuniculus (Rabbit，兔)
蛋白表達(dá)及純化：
1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。
3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。
特性:
重組蛋白分為凍干粉和溶液態(tài)兩種保存形式,原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為凍干粉狀態(tài),真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白為溶液態(tài)保存,這樣使得重組蛋白非常穩(wěn)定,在-80℃條件下可保存數(shù)年。凍干粉在使用前需進(jìn)行溶解,其中溶解的方法非常關(guān)鍵,因?yàn)槿芙獠缓脮?huì)降低蛋白的效用。溶液態(tài)保存的重組蛋白在凍融稀釋使用過程中也需要仔細(xì)注意,這些都是用戶在實(shí)際應(yīng)用中經(jīng)常遇到的問題。
(1)原核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。Immune tech大腸桿菌表達(dá)的凍干重組蛋白,已經(jīng)從包涵體中提純,添加了蛋白保護(hù)劑,使用過濾后的無菌水作為復(fù)溶劑即可,復(fù)溶凍干蛋白100 μg,用86 μl的超純水,輕輕搖晃使蛋白溶解,再用移液槍的槍頭輕吹幾下即可溶解,一定不能使用渦旋儀進(jìn)行快速振蕩或劇烈搖晃。
(2)真核細(xì)胞表達(dá)的重組蛋白。有活性的蛋白質(zhì)不僅要轉(zhuǎn)錄和翻譯,還要進(jìn)行翻譯后的加工,使得蛋白質(zhì)的空間折疊方式維持正常,所以重組蛋白必須在真核細(xì)胞中進(jìn)行,如哺乳動(dòng)物細(xì)胞能夠識(shí)別和去除基因中的內(nèi)含子,對(duì)翻譯后的蛋白質(zhì)進(jìn)行加工,這樣表達(dá)的蛋白質(zhì)具有生物活性。我們用溶液態(tài)來保存,保持了其良好的活性和穩(wěn)定性。
(3)類固醇5α還原酶1(SRD5α1)重組蛋白的保護(hù)劑。在凍干和儲(chǔ)存過程中常用的保護(hù)劑或穩(wěn)定劑有糖類,多元醇,聚合物,表面活性劑,某些蛋白和氨基酸等。我們通常加8%(質(zhì)量比體積)的海藻糖作為凍干保護(hù)劑。海藻糖可明顯阻止蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)改變以及凍干過程中蛋白質(zhì)的伸展和聚集,也是一種普遍應(yīng)用的凍干保護(hù)劑和填充劑。
基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)重組蛋白物種：Canis familiaris; Canine (Dog，犬)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)
基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)重組蛋白物種：Equus caballus; Equine (Horse，馬)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)
基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP3)重組蛋白物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 3 (MMP3)
基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)重組蛋白物種：Bos taurus; Bovine (Cattle，牛)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)
基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)
基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)
基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)重組蛋白物種：Cavia (Guinea pig ，豚鼠)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 8 (MMP8)
基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 8 (MMP8)
基質(zhì)金屬蛋白酶8(MMP8)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 8 (MMP8)
肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白物種：Bos taurus; Bovine (Cattle，牛)英文名稱：Recombinant Creatine Kinase, Muscle (CKM)
肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白物種：Canis familiaris; Canine (Dog，犬)英文名稱：Recombinant Creatine Kinase, Muscle (CKM)
肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白物種：Chicken (Gallus，雞)英文名稱：Recombinant Creatine Kinase, Muscle (CKM)
肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)英文名稱：Recombinant Creatine Kinase, Muscle (CKM)
肌肌酸激酶(CKM)重組蛋白物種：Oryctolagus cuniculus (Rabbit，兔)英文名稱：Recombinant Creatine Kinase, Muscle (CKM)
核糖核酸酶T2(RNASET2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)英文名稱：Recombinant Ribonuclease T2 (RNASET2)
核糖核酸酶T2(RNASET2)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)英文名稱：Recombinant Ribonuclease T2 (RNASET2)
胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)英文名稱：Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)
胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)英文名稱：Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)
胞外超氧化物歧化酶(SOD3)重組蛋白物種：Oryctolagus cuniculus (Rabbit，兔)英文名稱：Recombinant Superoxide Dismutase 3, Extracellular (SOD3)
內(nèi)皮細(xì)胞TEK激酶(Tie2)重組蛋白物種：Bos taurus; Bovine (Cattle，牛)英文名稱：Recombinant TEK Tyrosine Kinase, Endothelial (Tie2)
內(nèi)皮細(xì)胞TEK激酶(Tie2)重組蛋白物種：Danio rerio (Zebrafish，斑馬魚)英文名稱：Recombinant TEK Tyrosine Kinase, Endothelial (Tie2)
MARCKS相關(guān)蛋白(MARCKSL1)重組蛋白內(nèi)皮細(xì)胞TEK激酶(Tie2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)英文名稱：Recombinant TEK Tyrosine Kinase, Endothelial (Tie2)
內(nèi)皮細(xì)胞TEK激酶(Tie2)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)英文名稱：Recombinant TEK Tyrosine Kinase, Endothelial (Tie2)
操作步驟：
Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取
1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2． 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；
3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；
4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取
1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；
2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；
3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：
細(xì)胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個(gè) | 0.5 mL～1 mL |
5×106個(gè) | 0.2 mL～0.5 mL |
5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；
6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；
7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
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