HyCyte成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

Human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells（H BMSCs）

HyCyte成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 取自18-45歲成人骨髓，傳代擴(kuò)增至第二代凍存。本產(chǎn)品經(jīng)生物安全檢測，無細(xì)菌、真菌、霉菌、支原體和病毒污染，表達(dá)多種人源間質(zhì)干細(xì)胞特異性標(biāo)記，具有良好的增殖和分化潛能，可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。

細(xì)胞名稱：成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

細(xì)胞簡稱：H MSC

產(chǎn)品貨號(hào)：BMHX-C106

種屬來源：人

規(guī)格：1× 10^6 cells/Vial

組織來源：骨髓

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

配套培養(yǎng)基貨號(hào)：BMHX-G101

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測：細(xì)菌、真菌、支原體檢測均為陰性

毒素檢測：＜10 EU/mL

參考文獻(xiàn)：

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| 收貨后處理方法

收到細(xì)胞后請(qǐng)檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損，并核對(duì)管身標(biāo)簽信息和數(shù)量，

確認(rèn)是否與裝箱單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

如不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)將細(xì)胞放至-80℃或液氮中保存。

| 產(chǎn)品描述

蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司提供的間充質(zhì)干細(xì)胞取自成人骨髓，經(jīng)檢測，確保細(xì)胞無細(xì)菌、真菌、支原體和病毒污染，表達(dá)多種間充質(zhì)干細(xì)胞特異性表面標(biāo)記，具有良好的增殖和分化潛能，經(jīng)定向誘導(dǎo)，可分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞等。

凍存代次： P2

培養(yǎng)體系： HyCyteTM成人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基（Cat. BMHX-G101）

換液時(shí)機(jī)： 發(fā)現(xiàn)有比較多的死細(xì)胞或培養(yǎng)基顏色較黃時(shí)，應(yīng)換液。一般為每 2-3 天換液

傳代比例： 一般為 1:2

傳代周期： 細(xì)胞匯合度達(dá) 80%~90%時(shí)，可進(jìn)行傳代，一般為 48~72 h，

不可讓間充質(zhì)干細(xì)胞融合或過度融合，以免發(fā)生生長接觸抑制，影響細(xì)胞的生長狀態(tài)。

培養(yǎng)條件： 氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件： 海星一步凍存液 HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

NOTE：該產(chǎn)品僅供科研使用，不可用于其他方面。

使用說明書：

| HyCyteTM H BMSCs 的復(fù)蘇

1) 實(shí)驗(yàn)前開啟水浴鍋預(yù)熱培養(yǎng)基。

2) 在工作臺(tái)中準(zhǔn)備好 15 mL 離心管加入 5 mL預(yù)熱后的培養(yǎng)基。

3) 從-80°C 冰箱中取出凍存管，將凍存管置于37℃水浴鍋內(nèi)，快速搖動(dòng)解凍直到內(nèi)容物融化，同時(shí)需注意避免水面沒過管口。

NOTE：建議將液氮中的細(xì)胞提前取出置于-80°C 待液氮揮發(fā)后復(fù)蘇。

4) 對(duì)凍存管外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后，在工作臺(tái)內(nèi)小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次，轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管內(nèi)。使用 1 mL 培養(yǎng)基

清洗凍存管內(nèi)壁，一并收集至 15 mL 離心管內(nèi)。

5) 250 g 離心 5 min，收集細(xì)胞沉淀，棄掉上清并加入 2 mL 培養(yǎng)基重懸（如有臺(tái)盼藍(lán)可取少量進(jìn)行染色計(jì)數(shù)）。

6) 將重懸后的細(xì)胞接種至 T25 或同等底面積器皿，“劃十字”搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布。把細(xì)胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

7) 24h 后鏡下拍照觀察，換液后繼續(xù)培養(yǎng)。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

| HyCyteTM H BMSCs 的傳代

1) 預(yù)熱 1×PBS、胰酶和培養(yǎng)基。

2) 吸去原培養(yǎng)基。用 1×PBS 洗滌細(xì)胞 2~3 次。

3) 吸去 1×PBS。加入胰酶。輕輕旋轉(zhuǎn)，使胰酶 覆蓋細(xì)胞表面，消化，顯微鏡下觀察約 70%~80%左右的細(xì)胞變圓后，用手輕拍培養(yǎng) 器皿外壁使細(xì)胞脫壁。

4) 當(dāng)觀察到細(xì)胞明顯脫落，立即加入預(yù)熱的培養(yǎng)基終止消化。用吸管吸取液體，反復(fù)輕 柔吹打培養(yǎng)器皿底壁，使細(xì)胞脫離器皿底壁。

NOTE：建議可添加 2 倍胰酶用量的完培用于 終止消化。

5) 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中。用 1xPBS 清洗 底壁，收集細(xì)胞懸液至離心管中。

6) 250 g 離心 5 min。

7) 小心棄去上清液，加入 1~2mL 完培重 懸細(xì)胞。

8) 選擇合適的培養(yǎng)器皿，加入適量完培， 按照合適的傳代比例（一般為 1:2）接種細(xì)胞,“劃十字”搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布。

9) 把細(xì)胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)。

HyCyteTM H BMSCs 的凍存

1) 待細(xì)胞生長至可傳代的匯合度，即可消化準(zhǔn)備 凍存。

2) 消化細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)。細(xì)胞懸液經(jīng) 250 g離心5 min。

3) 小心棄掉上清。用4°C預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞， 一般凍存密度為1×10^6個(gè)/mL。

4) 對(duì)凍存管進(jìn)行標(biāo)識(shí)后，把細(xì)胞分裝到凍存管中， 旋緊凍存管蓋。

5) 如使用HyCyteTM海星一步凍存液，凍存管直接 豎直放入-80°C冰箱即可。 如使用程序凍存液，需將凍存管放入程序降溫 盒后方可放入-80°C冰箱。

6) 24小時(shí)后可將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮進(jìn)行長期保存。