原代神經(jīng)干細(xì)胞

1. 犧牲胎齡14-16天的SD大鼠，刮除腹部手術(shù)區(qū)域的毛發(fā)，75%乙醇全身浸泡消毒。

2. 解剖孕鼠，取出子宮并沖洗。

3. 取出胚胎，置于含有冰冷的HBSS液平皿中。

4. 手shu顯wei鏡下剝離出大腦半球，小心地剝?nèi)ツX膜和血管。

5. 剝?nèi)ツX膜和血管的大腦皮質(zhì)，用冰冷的HBSS液清洗三次。

6. 將大腦皮質(zhì)剪成1mm³的小塊，用1ml槍頭輕輕吹打后，使之成為細(xì)胞懸液，并通過70um的篩網(wǎng)過濾。

7. 將收集到的細(xì)胞懸液離心后，用神經(jīng)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸，然后離心，棄掉上清液。

8. 經(jīng)計(jì)數(shù)和活力觀察，將細(xì)胞密度調(diào)至1×10⁶/ml，以1.5×10⁵/ml的細(xì)胞密度種入T25培養(yǎng)瓶中，同時(shí)加入FGF-2和EGF于5%CO₂、37℃環(huán)境中培養(yǎng)，直到神經(jīng)干細(xì)胞分裂、增殖形成較大的神經(jīng)細(xì)胞球后再作傳代處理。

9. 細(xì)胞傳代，將神經(jīng)細(xì)胞球懸液移至離心管，經(jīng)低速離心后，吸棄上清液，加入神經(jīng)干細(xì)胞完quan培養(yǎng)液，用200ul槍頭吹打，使之成為單個(gè)細(xì)胞懸液，定量加入神經(jīng)干細(xì)胞完quan培養(yǎng)液后，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力觀察。

10. 傳代后的細(xì)胞既可用來誘導(dǎo)分化，也可以繼續(xù)種瓶培養(yǎng)，還可以冷凍保存以備后用。

11. 神經(jīng)干細(xì)胞的分化和鑒定。

原代神經(jīng)干細(xì)胞

  伊萊博生物科技（上海）有限公司，公司總部位于上海長江軟件園。2022年1月與上海交通大學(xué)藥學(xué)院成立聯(lián)合研究中心，主要以生命科學(xué)研究為基礎(chǔ)，專注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務(wù)創(chuàng)新，建立了包含腫瘤生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等學(xué)科的研究服務(wù)體系，為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。

      伊萊博生物擁有豐富的研究經(jīng)驗(yàn)，具備完善的系統(tǒng)化管理能力和科研服務(wù)體系。目前已自建細(xì)胞、分子、病理等實(shí)驗(yàn)平臺(tái)近1000平方米，擁有精良的儀器設(shè)備、細(xì)胞庫、樣本保存庫等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心近1800平方米，可滿足同時(shí)飼養(yǎng)清潔級(jí)和SPF級(jí)動(dòng)物。核心實(shí)驗(yàn)技術(shù)團(tuán)隊(duì)主要來自中國科學(xué)院大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)等重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu)，能夠?yàn)榭蛻籼峁┭芯糠桨覆邉潯㈨?xiàng)目實(shí)施及項(xiàng)目深度分析等方面的技術(shù)支持。公司目前參與研究項(xiàng)目已經(jīng)涵蓋心腦血管、腫瘤、內(nèi)分泌、生殖、免疫、神經(jīng)等諸多領(lǐng)域。