人胰腺癌類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒

Pancreatic Cancer Organoid Culture Kit

人胰腺癌類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒使用說(shuō)明

請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下配制類(lèi)器官完培：

1.將類(lèi)器官培養(yǎng)添加物置于冰上或4℃冰箱中解凍，解凍后需充分混勻。

注：解凍后的添加物需立即使用或分裝，-20℃保存最長(zhǎng)6個(gè)月。再次解凍后需立即使用，避免反復(fù)凍融。

2.將全部補(bǔ)充劑加入同一試劑盒中的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，充分混勻。

注：本產(chǎn)品中已含有抗生素。完培在4℃最長(zhǎng)保存2周，建議分裝后凍存于-20℃保存。

腫瘤類(lèi)器官的構(gòu)建方法

（一）手術(shù)/穿刺樣本

1.將樣本從Primary Tissue Storage Solution（R25831）中取出，置于5mL含有1%雙抗的DPBS中清洗，重復(fù)清洗3次以上。

2.棄去含有1%雙抗的DPBS后，將樣本用surgical剪刀剪碎至肉糜狀，大小約0.5mm3，用5mL Tumor Tissue Digestion Kit（R25829）將肉糜狀的樣本組織轉(zhuǎn)移至15mL離心管中。

3.將該離心管置于搖床37℃溫和搖晃消化60min，使管中懸濁液可接觸到管蓋及管底，但不要過(guò)于劇烈，在搖晃過(guò)程中，約每30min取200μL懸濁液于顯微鏡下觀察是否有細(xì)胞，若觀察到大量的單細(xì)胞，應(yīng)提前終止消化。

4.消化結(jié)束后，于該離心管中加入500μL血清終止消化，于1,200rpm/min離心5min。

5.棄去上清，用2mL含有1%雙抗的DPBS對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行重懸。

6.在50mL離心管上架一個(gè)100μm的細(xì)胞濾網(wǎng)，用槍頭潤(rùn)洗液（R25832）對(duì)細(xì)胞濾網(wǎng)和后續(xù)使用的槍頭進(jìn)行潤(rùn)洗，將第5步中的細(xì)胞重懸液加入細(xì)胞濾網(wǎng)中，過(guò)濾后的細(xì)胞懸液于1,200rpm/min離心5min。

7.棄去上清，若細(xì)胞沉淀顏色呈紅色，加入2mL紅細(xì)胞裂解液吹打后冰上裂紅10min；若細(xì)胞沉淀顏色呈黃白色，直接進(jìn)行下一步。

8.細(xì)胞計(jì)數(shù)，按照1,000個(gè)細(xì)胞/μL LYJUNE®Matrix低因子無(wú)酚紅基質(zhì)膠（M10270）的比例重懸細(xì)胞，注意不要產(chǎn)生氣泡，于冰上操作。

9.含有細(xì)胞的基質(zhì)膠點(diǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)板中形成膠滴，于37℃培養(yǎng)箱中正置5min，倒置15min，使膠滴凝固卻避免細(xì)胞貼壁。

10.膠滴凝固后，貼著細(xì)胞培養(yǎng)孔壁緩緩加入本產(chǎn)品——類(lèi)器官完培，以淹沒(méi)整個(gè)膠滴。將DPBS圍繞加入已接種類(lèi)器官的孔中，以維持細(xì)胞培養(yǎng)板的濕度。置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

（二）惡性積液樣本

1.將惡性積液樣本轉(zhuǎn)移至離心管中，于1,200rpm/min離心5min。

2.棄去上清，用20mL含有1%雙抗的DPBS對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行重懸，于1,200rpm/min離心5min。

3.棄去上清，用5mL含有1%雙抗的DPBS對(duì)細(xì)胞沉淀進(jìn)行重懸。

4.在50mL離心管上架一個(gè)100μm的細(xì)胞濾網(wǎng)，用槍頭潤(rùn)洗液（R25832）對(duì)細(xì)胞濾網(wǎng)和后續(xù)使用的槍頭進(jìn)行潤(rùn)洗，將第3步中的細(xì)胞重懸液加入細(xì)胞濾網(wǎng)中，過(guò)濾后的細(xì)胞懸液于1,200rpm/min離心5min。

5.棄去上清，若細(xì)胞沉淀顏色呈紅色，加入2mL紅細(xì)胞裂解液吹打后冰上裂紅10min；若細(xì)胞沉淀顏色呈黃白色，直接進(jìn)行下一步。

6.細(xì)胞計(jì)數(shù)，按照1,000個(gè)細(xì)胞/μL LYJUNE®Matrix低因子無(wú)酚紅基質(zhì)膠（M10270）的比例重懸細(xì)胞，注意不要產(chǎn)生氣泡，于冰上操作。

7.含有細(xì)胞的基質(zhì)膠點(diǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)板中形成膠滴，于37℃培養(yǎng)箱中正置5min，倒置15min，使膠滴凝固卻避免細(xì)胞貼壁。

8.膠滴凝固后，貼著細(xì)胞培養(yǎng)孔壁緩緩加入本產(chǎn)品——人胰腺癌類(lèi)器官培養(yǎng)試劑盒，以淹沒(méi)整個(gè)膠滴。將DPBS圍繞加入已接種類(lèi)器官的孔中，以維持細(xì)胞培養(yǎng)板的濕度。置于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。