光譜儀和分光光度計(jì)
- 公司名稱 北京博奧聚合科技有限公司
- 品牌 WPI
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2024/5/6 16:42:15
- 訪問次數(shù) 740
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產(chǎn)地類別 | 進(jìn)口 | 價(jià)格區(qū)間 | 面議 |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,食品,化工,綜合 |
儀器概況
光譜儀(spectrometer)和分光光度計(jì)(Spectrophotometer),是將成分復(fù)雜的光分解為光譜線的科學(xué)儀器。
當(dāng)光線通過某種物質(zhì)的溶液時(shí)透過的光的強(qiáng)度減弱,因?yàn)橛幸徊糠止庠谌芤旱谋砻娣瓷浠蚍稚?,一部分?被組成此溶液的物質(zhì)所吸收,只有一部分光可透過溶液。因此:
入射光=反射光+分散光+吸收光+透過光。
如果我們用蒸餡水(或組成此溶液的溶劑)作為“空白”去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失,則 出現(xiàn):
入射光=吸收光十透過光。
不同的光源都有其發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源。不同物質(zhì)都有特定的吸收光譜,根據(jù)溶液的吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質(zhì)成分。
鈣燈發(fā)射光譜:鴇燈光源所發(fā)出380?780nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅、橙、黃、綠、 藍(lán)、靛、紫組成的連續(xù)色譜,該色譜可作為可見光分光光度計(jì)的光源。
氫燈(或笊燈)發(fā)射光譜:氫燈(或気燈)能發(fā)出185-400nm波長的光譜,可作為紫外光光度計(jì)的光源。
常用的波長范圍包括:
(1) 200?380nm的紫外光區(qū);
(2) 380~780nm的可見光區(qū);
(3) 2.5?25卩m (按波數(shù)計(jì)為4000/®米?400/厘米)的紅外光區(qū)。
用于測量200?380nm的紫外光區(qū)物質(zhì)吸光度的儀器為紫外分光光度計(jì);
用于測量380?780nm的可見光區(qū)物質(zhì)吸光度的儀器為可見光分光光度計(jì)(或比色計(jì)):
用于測量2.5?25〃 m (按波數(shù)計(jì)為4000/厘米?400/厘米)的紅外光區(qū)物質(zhì)吸光度的儀器為紅外分光光度計(jì) 或原子吸收分光光度計(jì)。
工作原理
光譜儀和分光光度計(jì)釆用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源,通過系列分光裝置,從而產(chǎn)生特定波長的光源, 光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計(jì)算樣品的吸光值,從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品 的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液吋,被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比, 其關(guān)系如下式:
A=-lg(I/Io)=-lgT=kLc
式中:A為吸光度:Io為入射的單色光強(qiáng)度;1為透射的單色光強(qiáng)度:T為物質(zhì)的透射率;k為摩爾吸收系數(shù); L為被分析物質(zhì)的光程,即比色皿的邊長;c為物質(zhì)的濃度;
儀器用途
1. 核酸的定量
核酸定量是紫外光譜儀和紫外分光光度計(jì)使用頻率最高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核昔酸,單鏈、 雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260nm。
除了核酸濃度,光譜儀和分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值, 用于評估樣品的純度,因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nmo
純凈的樣品,比值大于1.8 (DNA)或者2.0 (RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類 物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比 值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品,A320一般是0。
2. 蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長直接測試蛋白,光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度,或者是選擇相應(yīng)的換算方法, 將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存 在一些雜質(zhì),一般要消除320nm的“背景”信息。
3. 比色法蚩白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的混合物,比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸) 與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng),產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反映的氨基酸數(shù)目直接相關(guān),從而 反映蛋白質(zhì)濃度。比色方法一般有BCA、Bradford、Lowry等兒種方法。
4. 細(xì)菌細(xì)胞密度(OD 600)
實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長密度和生長期,多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測推斷細(xì)菌的生長密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn),需要 釆用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。以未加菌液的培養(yǎng) 液作為空白液,之后定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。
5. 海洋學(xué)研究中痕量物質(zhì)濃度
WPI公司設(shè)計(jì)長光程液態(tài)樣本流通池(LWCC)具有50、100、250和500不同的光程可以選擇。因此,不同 光程長度的LWCC配合適的光源和檢測器,常用于海洋學(xué)應(yīng)用中營養(yǎng)物分析的流體注射分析系統(tǒng)(如硝酸鹽、 亞硝酸鹽、磷酸鹽和鐵離子檢測等)。海水和淡水中CDOM (有色溶解有機(jī)物含量)的檢測,因?yàn)楹K蠧DOM的 含量極低(0.007m-l)。
6. 大氣環(huán)境中超低含量物質(zhì)濃度
大氣中的SO2、硝酸鹽、亞硝酸鹽、羥基、棕碳、黑碳、水溶性鐵、氣溶膠等含量很低,使用普通的分光光 度計(jì)很難檢測出來。將大氣中釆集的樣本液態(tài)化,再配合不同光程的LWCC進(jìn)行檢測,可以將這些含量極低的 物質(zhì)加以檢出。