11185ES Hieff UNICON® advanced qPCR SYBR Master Mix
參考價 | ¥393.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號11185ES
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2023/10/21 22:59:25
- 訪問次數(shù) 426
1ml | 393.00元 | 999 件可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,制藥 |
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產(chǎn)品簡介
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix是2×實時定量PCR擴增的預(yù)溶液,具有熒光強度高,靈敏度高和特異性強,擴增產(chǎn)量高等特點,顏色為藍(lán)色,具有加樣示蹤的作用。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動,可以有效抑制樣品準(zhǔn)備過程中引物退火導(dǎo)致的非特異性擴增。同時配方添加了提升PCR反應(yīng)擴增效率因子和均衡不同GC含量(30~70%)基因擴增的促進(jìn)因子,使定量PCR可以在寬廣的定量區(qū)域內(nèi)獲得良好的線性關(guān)系。
產(chǎn)品信息
貨號 | 11185ES03/11185ES08/11185ES50/11185ES60 |
規(guī)格 | 1 mL/5×1 mL/50×1 mL/100×1 mL |
儲存條件
-25~-15℃避光保存,有效期18個月。
使用說明
推薦qPCR反應(yīng)體系
組分 | 體積 (μL)*** | 體積 (μL)*** | 終濃度 |
Hieff UNICON® Advanced qPCR SYBR Master Mix | 25 | 10 | 1× |
Forward Primer (10 μM)* | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
Reverse Primer (10 μM)* | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
模板DNA/cDNA** | x | x | - |
無菌超純水 | Up to 50 | Up to 20 | - |
表1 qPCR反應(yīng)體系
*通常引物終濃度為0.2 μM,也可以根據(jù)情況在0.1-1.0 μM之間進(jìn)行調(diào)整。
**如模板為未稀釋cDNA原液,使用體積不應(yīng)超過qPCR反應(yīng)總體積的1/10,最佳模板加入量以保證擴增得到的Ct值在20-30個循環(huán)為宜。
***推薦使用20 μL或50 μL,以保證目的基因擴增的有效性和重復(fù)性;上機前需充分混勻,避免劇烈震蕩產(chǎn)生過多氣泡。
反應(yīng)程序
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 2 min | 1 |
變性 | 95℃ | 10 sec | 40 |
退火/延伸* | 60℃ | 30 sec** | |
熔解曲線階段* | 儀器默認(rèn)設(shè)置 | 1 |
表2 qPCR反應(yīng)程序
*退火溫度和時間:請根據(jù)引物和目的基因的長度進(jìn)行調(diào)整。
**熒光信號采集:請勿忘記打開熒光信號采集,按照儀器使用說明書要求進(jìn)行實驗程序設(shè)置,幾種常見儀器的時間設(shè)定如下:
20 sec:Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec:Applied Biosystems 7300
32 sec:Applied Biosystems 7500
***熔解曲線:通常情況下可以使用儀器默認(rèn)程序。
適用機型
ABI:7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio1, 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon,Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0, Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR
引物設(shè)計指南
推薦引物長度25 bp左右。擴增產(chǎn)物長度150 bp為佳,可以在100 bp-300 bp內(nèi)選擇。
正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
引物堿基分布均勻,避免出現(xiàn)連續(xù)的4個相同堿基,GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。
引物內(nèi)部或者正反兩條引物間最好避免出現(xiàn)有3個堿基以上的互補序列。
引物特異性需要用NCBI BLAST程序進(jìn)行核對。避免引物 3’端有2個堿基以上的非特異性互補。
設(shè)計完成的引物需要進(jìn)行擴增效率的檢測,只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。
注意事項
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
解凍后Master Mix可能出現(xiàn)絮狀或白色沉淀,手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清,不影響試劑性能。
推薦使用本公司cDNA合成試劑盒(貨號:11141ES),以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
若需要電泳,為了獲得清晰的條帶,建議將qPCR產(chǎn)物稀釋20-30倍后進(jìn)行電泳。
本產(chǎn)品僅作科研用途!