11803ES DH5α Fast Chemically Competent Cell F
參考價(jià) | ¥186.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號11803ES
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間2023/10/22 21:11:07
- 訪問次數(shù) 270
10×100 μL | 186.00元 | 99 件可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
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產(chǎn)品簡介
本產(chǎn)品采用DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到得感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化,廣泛適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增,能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳,適用于藍(lán)白斑篩選。DH5α細(xì)胞重組酶recA1和核酸內(nèi)切酶endA1基因缺失突變使其能保證克隆DNA的穩(wěn)定性。F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,無需42℃熱激,37℃孵育,只需10 min即可完成一次轉(zhuǎn)化。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率約達(dá)108 cfu/μg DNA。
DH5α細(xì)胞基因型:F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA
產(chǎn)品組分
組分編號 | 組分名稱 | 11803ES80 |
11803-A | F-DH5α 感受態(tài)細(xì)胞 | 10×100 μL |
11803-B | pUC19 (control vector, 10 pg/μL) | 10 μL |
儲存條件
-85℃~-65℃保存,有效期6個(gè)月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。
使用方法
快速轉(zhuǎn)化操作方法(10 min)
1)提前15分鐘將用到的篩選培養(yǎng)基平板拿到37℃預(yù)熱。
2)將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上,待菌體融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物),輕輕彈勻,冰浴靜置5 min。
*所加DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
3)用200 μL移液槍將上一步的混合物轉(zhuǎn)移到已經(jīng)37℃預(yù)熱的LB培養(yǎng)基上,均勻涂布。
4)將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h。
快速熱激轉(zhuǎn)化操作方法(25 min,可提高轉(zhuǎn)化效率)
1)將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上,待菌體融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物),輕輕彈勻,冰浴靜置5 min。
*所加DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
2)42℃水浴熱激45 sec,迅速插回冰上靜置2 min,此過程不要晃動。加入700 μL不含抗生素的LB,37℃,200 rpm復(fù)蘇10分鐘,均勻涂板。
3)將平板置于37℃培養(yǎng)箱倒置過夜培養(yǎng)。若進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,平板在37℃至少倒置培養(yǎng)15 h。
常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化操作方法
1)將F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出迅速插入冰上,冰浴、解凍(大約5 min)。
2)立即向解凍后的感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA,輕輕彈勻,冰浴靜置25 min。
*所加DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
3)42℃水浴中熱激45 sec,然后快速將EP管轉(zhuǎn)移到冰上,靜置2 min。
*此過程不要晃動,否則會降低轉(zhuǎn)化效率。
4)向離心管中加入700 μL左右不含抗生素的LB或2YT培養(yǎng)基,混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60 min。
5)5,000 rpm離心1 min收集菌體,留取100 μL左右上清涂布至含有相應(yīng)抗生素的培養(yǎng)板上,37℃培養(yǎng)過夜。如進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,請將平板放 37℃培養(yǎng)至少15 h。
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品不可反復(fù)凍融,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2. 本產(chǎn)品在冰中解凍時(shí)間不宜過長,感受態(tài)細(xì)胞剛化凍時(shí)轉(zhuǎn)化效率高。
3. 加入質(zhì)粒應(yīng)輕柔操作。
4. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞既可以快速轉(zhuǎn)化也可以常規(guī)熱激轉(zhuǎn)化,對于>7 kb質(zhì)粒的構(gòu)建,為提高轉(zhuǎn)化效率,可采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方式進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
5. F-DH5α感受態(tài)細(xì)胞涂氨芐/羧芐抗性平板時(shí)效率較高,若涂或其他抗生素平板,轉(zhuǎn)化效率下降(無孵育步驟,等對菌體毒性較大)。若要提高或其他抗性質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化效率,可增加孵育步驟。
6. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
7. 本產(chǎn)品僅作科研用途!