16816ES Hieff® Fast Cell Direct qPCR set (for probe)
| 參考價 | ￥615.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技（上海）股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號16816ES
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2024/1/17 10:03:17
- 訪問次數(shù) 206
| 2 mL | 615.00元 | 99 件可售 |
聯(lián)系方式：曹女士400-6111-883 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息，謝謝!
企業(yè)簡介
翌圣生物科技（上海）股份有限公司【Yeasen Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd.】是一家以蛋白質(zhì)改造和酶進化技術(shù)為驅(qū)動，聚焦生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)鏈上游核心原料，從事分子、蛋白和細胞三大品類生物試劑的研發(fā)、生產(chǎn)與銷售的高新技術(shù)企業(yè)，通過打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術(shù)開發(fā)路徑，成為國內(nèi)少數(shù)同時覆蓋三大品類生物試劑、兼?zhèn)浜诵募夹g(shù)自主研發(fā)能力和規(guī)模化生產(chǎn)能力的高新技術(shù)企業(yè)，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究領(lǐng)域、診斷與檢測領(lǐng)域和生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
主營業(yè)務(wù)
公司憑借在蛋白質(zhì)改造和酶進化領(lǐng)域的技術(shù)優(yōu)勢和深耕生物試劑行業(yè)多年積累的豐富經(jīng)驗，構(gòu)建了品質(zhì)優(yōu)良、類型齊全、種類豐富的產(chǎn)品管線。自公司成立以來，公司研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的生物試劑超過3000種，涵蓋分子、蛋白、細胞三大品類的生物試劑，能夠滿足客戶多種類型生物試劑的一體化采購需求。公司核心產(chǎn)品覆蓋qPCR系列、NGS系列、逆轉(zhuǎn)錄系列、核酸提取與純化系列、PCR系列、分子克隆系列、體外轉(zhuǎn)錄系列、抗體、蛋白純化系列、蛋白分析系列、重組蛋白、細胞分析系列、細胞培養(yǎng)系列、細胞轉(zhuǎn)染系列、報告基因檢測系列等多個品類的生物試劑，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、診斷檢測和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域。
發(fā)展歷程
榮譽資質(zhì)
翌圣生物通過申請商標(biāo)和軟件著作權(quán)的方式保障核心技術(shù)和市場競爭力，不斷加強公司品牌建設(shè)。截至2022年3月31日，公司已經(jīng)獲得授權(quán)18項（其中發(fā)明14項、實用新型1項、外觀設(shè)計3項）和45項與生物試劑相關(guān)的軟件著作權(quán)，擁有經(jīng)國家知識產(chǎn)權(quán)局商標(biāo)局核準(zhǔn)的注冊商標(biāo)權(quán)37項以及4項境外注冊商標(biāo)，是國家高新技術(shù)企業(yè)和上海市專精特新企業(yè)。
創(chuàng)新平臺
經(jīng)過多年的產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)經(jīng)驗的沉淀以及持續(xù)的研發(fā)創(chuàng)新，翌圣生物積極開展“產(chǎn)學(xué)研”合作，與擁有生物催化與酶領(lǐng)域國家重點實驗室的湖北大學(xué)、擁有教育部工業(yè)生物領(lǐng)域重點研究基地的江南大學(xué)展開合作，優(yōu)化生物試劑關(guān)鍵原料的生產(chǎn)和表達工藝。翌圣生物以基因工程技術(shù)、生物信息技術(shù)、細胞生物學(xué)技術(shù)、免疫學(xué)技術(shù)、生化分析技術(shù)等生命科學(xué)領(lǐng)域的共性生物技術(shù)為基礎(chǔ)，建立了六大核心技術(shù)平臺——雙向分子酶理性設(shè)計與定向進化平臺、密度發(fā)酵與超潔凈純化平臺、分子診斷試劑關(guān)鍵原料研發(fā)平臺、高通量測序建庫試劑創(chuàng)新研發(fā)平臺、高性能單克隆抗體研發(fā)平臺和mRNA醫(yī)藥應(yīng)用研發(fā)平臺，目前已經(jīng)自主研發(fā)出20項核心技術(shù)，打通分子酶、蛋白、抗體、核酸、細胞的技術(shù)開發(fā)路徑，覆蓋技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品升級、規(guī)模生產(chǎn)和質(zhì)量控制等生物試劑研發(fā)和生產(chǎn)的各關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
工業(yè)化生產(chǎn)
翌圣生物擁有按照準(zhǔn)GMP 標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)運營的工業(yè)化生產(chǎn)基地，配有噸級發(fā)酵線、工業(yè)級 AKTA 純化線和全自動包裝線。同時，公司通過了ISO 13485:2016質(zhì)量管理體系認證，從原料控制、生產(chǎn)管理、質(zhì)檢管控、倉儲運輸?shù)葘ιa(chǎn)線進行360度管理監(jiān)督，保證產(chǎn)品過程的可控制性及可追溯性，竭盡全力為您提供可靠的產(chǎn)品。
客戶服務(wù)
翌圣生物憑借優(yōu)質(zhì)穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量、高效及時的響應(yīng)能力、快速穩(wěn)定的交付能力和周到完備的售后服務(wù)獲得了眾多科研用戶和工業(yè)用戶的認可，為檢測公司、治療公司、工具類公司和科學(xué)研究實驗室提供應(yīng)用于科學(xué)研究、體外診斷、基因測序、生物醫(yī)藥等的生物試劑。與中國科學(xué)院、清華大學(xué)、北京大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)、浙江大學(xué)等頂尖科研院所和華大基因、恒瑞醫(yī)藥、藥明康德、之江生物、圣湘生物、斯微生物、金斯瑞、思路迪等工業(yè)客戶建立了穩(wěn)定、緊密的合作關(guān)系，公司產(chǎn)品被多次使用在Nature、Science、Cell等國際頂級期刊論文發(fā)表中。
公司企業(yè)文化
幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂
◎ 成為生命科學(xué)工具領(lǐng)域全球Top⑩
◎ 具備驅(qū)動產(chǎn)業(yè)變革的技術(shù)創(chuàng)新能力
◎ 擁有一支持續(xù)學(xué)習(xí)型的翌圣鐵軍
翌圣生物始終秉承“幫助客戶創(chuàng)造價值，讓世界更健康更快樂”的使命，專注于技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)品升級，不斷拓展核心技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域，為客戶提供更為的產(chǎn)品與服務(wù)，助力我國打造自主可控的生物試劑產(chǎn)業(yè)鏈。同時，翌圣生物將進一步推進國際化戰(zhàn)略，繼續(xù)布局和拓展海外市場，為全球生物試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展貢獻力量。
分子生物學(xué)試劑，細胞生物學(xué)試劑，免疫學(xué)試劑，蛋白組學(xué)試劑等
| 供貨周期 | 兩周 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
|---|
Hieff® Fast Cell Direct Probe RT-qPCR Kit 適用于對各種動物細胞進行基因定量表達分析（如cell line 化的貼壁細胞和懸浮細胞、原代培養(yǎng)細胞、各種干細胞、iPS 細胞等），無需提RNA，可直接進行qPCR表達分析，用時短，操作簡單，出錯率低，最短只需1.5 h就可高效完成從模板制備到反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)及基因表達分析等步驟。該產(chǎn)品為探針法細胞直擴RT-qPCR試劑盒的熒光定量qPCR模塊，為補充試劑。
儲存條件
長期保存時請于-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
一、裂解產(chǎn)物的制備
將試劑放置室溫下融化，使用前上下顛倒，輕輕混勻，并輕微離心后使用，避免起泡。沒有混勻試劑、使用振蕩器混勻、未在冰上配置試劑等會導(dǎo)致反應(yīng)性能下降。
將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中*，5000 rpm離心2 min收集細胞**，充分吸除培養(yǎng)基。若貼壁細胞在96孔板中培養(yǎng)，可直接吸除培養(yǎng)基。
各個孔內(nèi)加入FCD Washing Buffer 150 μL，吸打清洗細胞，5000 rpm離心2 min，吸盡FCD Washing Buffer。
各孔中加入48 μL FCD Lysis Buffer溶液，2 μL DNase I溶液，室溫吸打混勻后靜置5 min，孵育后加入2.5 μL FCD Stop Solution***, 吸打混勻5次左右，即可得到裂解產(chǎn)物****，細胞數(shù)量超過1× 105 cells時可能會有裂解殘留物屬正?，F(xiàn)象。
*50 μL裂解體系適配細胞數(shù)的基本要求是每孔1× 102 - 1× 105 cells，若細胞數(shù)量較多，可適當(dāng)?shù)缺壤黾覨CD Lysis Buffer溶液和DNase Ⅰ溶液的用量。
**不同細胞的離心條件不同，請使用適合于所用細胞的離心速度進行離心。
***50 μL的裂解液需加入2.5 μL的FCD Stop Solution。依實驗需要，加入裂解液量增大時需相應(yīng)增大FCD Stop Solution的量。
****細胞裂解產(chǎn)物溶液長期保存時，請置于-25~-15℃。
二、反轉(zhuǎn)錄
室溫融化4× Hifair® FCD RT Mix后輕微顛倒混勻，置于冰上并按下表配置反應(yīng)體系：
組分 | 體積 （μL） | 終濃度 |
4× Hifair® FCD RT Mix | 5 | 1× |
裂解產(chǎn)物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 20 | - |
表1 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系
*避免吸入細胞碎片，推薦使用量為2 μl，最大不超過反應(yīng)體系的55%。
移液器輕輕混勻上述配制的反應(yīng)液，按下表程序進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)**：
反應(yīng)溫度 | 反應(yīng)時間 |
37℃ | 5 min |
85℃ | 5 sec |
表2 反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)程序
**反轉(zhuǎn)錄溫度推薦使用37℃，反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接進行下游qRT-PCR檢測。為避免反轉(zhuǎn)錄體系對qPCR反應(yīng)的抑制，得到合適的Ct值（10-35），可將產(chǎn)物稀釋10-1000倍后使用。若短時間內(nèi)不進行下游實驗，可放置于-25~-15℃保存。
三、熒光定量PCR
體系配置
使用下列組份比例配制反應(yīng)液（配制過程請于冰上進行）：
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2× Hieff® FCD Probe qPCR Mix | 12.5 | 1× |
Forward Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Reverse Primer (10 μM) | 0.5 | 200 nM |
Probe (10 μM) | 0.25-1 | 100-400 nM |
反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物* | x | - |
RNase-free H2O | Up to 25 | - |
表3 qPCR反應(yīng)體系
*高濃度模板易導(dǎo)致非特異擴增，可適當(dāng)將模板稀釋5-50倍。模板推薦用量4 μL。反應(yīng)性能較差時，可以在0.2-1.0 μM范圍內(nèi)調(diào)整引物探針濃度。
熒光定量PCR快速擴增程序（推薦）
本產(chǎn)品推薦使用快速程序擴增，可大大減少反應(yīng)時間。使用Tm值較低的引物難以擴增時，可額外調(diào)整退火溫度。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
變性 | 95℃ |
| 45 |
退火/延伸** | 60℃ | 10 sec |
表4 qPCR反應(yīng)程序（快速）
**退火/延伸溫度、終延伸時間可根據(jù)實驗要求適當(dāng)調(diào)整。 快速程序適用于絕大多數(shù)基因，個別復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)基因可嘗試常規(guī)程序。
熒光定量PCR常規(guī)擴增程序
實驗儀器不滿足快速反應(yīng)時間時，也可使用常規(guī)程序進行擴增。
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 95℃ | 10 sec | 1 |
變性 | 95℃ |
| 40-45 |
退火/延伸** | 60℃ | 30 sec |
表5 qPCR反應(yīng)程序（常規(guī)）
注意事項
使用前，將凍存的各組分充分融解并輕輕混勻后使用。
實驗時，請盡量使用無污染的耗材，避免污染。
本產(chǎn)品避免反復(fù)凍融，配制時應(yīng)避免強光照射。
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產(chǎn)品僅作科研用途！
采購中心
化工儀器網(wǎng)