細胞名稱：DC2.4DC2.4細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

培養(yǎng)步驟

a、細胞傳代:如果未超過80%匯合度時,將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中,留5ml培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵

箱培養(yǎng);如果細胞密度超80%,即可進行傳代培養(yǎng),

1)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞

消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,使之脫落后吸出,然后將懸液轉移至15ml離心管中,在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液

,補加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細胞懸液按1:2的比例進行分瓶傳代(兩個T25瓶),補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的細

胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2的比例

分到新的含8ml培養(yǎng)基的新瓶中。

方法二:可選擇半換液方式,棄半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新瓶

中。

b、細胞凍存:

1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次;

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化,再輕

輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心 5min;

3、 棄上清,沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液(貨號:C7001),混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要將細胞轉入液氮罐中,則需在-80℃冰箱 中存放24小時以上

再轉入液氮罐中。C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

C、細胞復蘇:

1、從液氮中取出細胞凍存管(注意佩戴防護面具),快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結晶,然后

用75%的酒精擦拭凍存管外壁;

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3、棄上清,沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸,接種至T25培養(yǎng)瓶,放于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 天,換用新鮮培養(yǎng)

基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發(fā)生容易細胞脫落，這是正?，F象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

收到貨后處理：

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿培養(yǎng)液并封好瓶口是運輸細胞的 辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶,消毒后

放到超凈臺內嚴格無菌操作,將細胞瓶放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)后再做處

理。顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照保存( 40x,100x,200x各一張),前三天照片是重要售

后依據,不提供照片默認收到狀態(tài)良好。(傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基,另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基,以便進

行對比培養(yǎng),換液擰松瓶蓋),該細胞的STR鑒定可向客服咨詢索取。

售后服務告知書

1）細胞出現問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

1. 細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)；

2. 細胞污染問題，請在收到產品48小時內，給我們提出真實的實驗結果，核實后重發(fā)；

3. 常溫發(fā)貨的細胞靜置24小時后，干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后，絕大多數細胞未存活，（需提供真實清晰的細胞狀態(tài)照片），重發(fā)；

4. 干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇后24小時后或常溫發(fā)貨的細胞靜置4小時候并且未開封，出現污染，重發(fā)；

5. 細胞活性問題，請在收到產品7天內給我們提出真實的實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，核實后予重發(fā)；

6. 細胞收到當天以及第2,3天請拍照，3天未告知的，視為產品合格。4-7天內出現問題有提供收到細胞前3天照片和細胞出現問題時照片以及細胞相關操作的詳細步驟的，并跟技術人員溝通的，由技術人員判定為我方責任的，重發(fā)。技術人員判定為雙方承擔責任的由雙方進行協商處理或者按合同價的50%收費重發(fā)。

二）細胞出現問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

1. 客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

2. 客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

3. 非本庫推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

5. 細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā)；

6. 細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；

7. 視具體情況而定。

YS2865CHUP-T3人胰腺癌細胞

YS2866C OE21人食道鱗狀癌細胞

YS2867C TYK-nu人卵巢癌細胞

YS2868C TOV-21G人上皮性卵巢癌細胞

YS2869C CHL-1人黑色素瘤細胞

YS2870C HUP-T4人胰腺癌細胞

YS2871C BpRc1小鼠肝癌細胞

YS2872C OVMANA人卵巢癌細胞

YS2873C LIXC-011人肝癌細胞

YS2874C LIXC-003人肝癌細胞

YS2875C LIC-0903LIC干細胞

YS2876C ATN-1人T白血病細胞細胞

YS2877C KP-N-YN人平滑肌細胞

YS2878C C8-D1A[AstrocytetypeIclone]小鼠小腦細胞

YS2879C COR-L105人原發(fā)性非小細胞肺癌

YS2880C BHK倉鼠腎成纖維細胞

YS2881C BEL7404人肝癌細胞

YS2882C Balb/3T3小鼠胚胎成纖維細胞

YS2884C AZ-521人胃癌細胞

YS2885C RCC10RGB人腎癌細胞

YS2886C HCC-78細胞

YS2887C DC2.4DC2.4

YS2888C NCI-H3122NCI-H3122

YS2889C mpc-5足細胞

YS2890C JAR(胎盤絨毛癌細胞

YS2891C MDCKMDCK細胞

YS2892C HEB人腦膠質細胞

YS2893C HIC-2小腸癌細胞

YS2894C 人T白血病細胞細胞

YS2895C 人急性淋巴白血病細胞細胞

YS2896C DMS-79人小細胞肺癌

YS2897C NCI-H2052人惡性胸膜間皮瘤細胞

YS2898C GA-10人B淋巴瘤細胞

YS2899C EB-3人伯基特淋巴瘤細胞

YS2900C NCI-H217人肺鱗癌細胞

YS2901C HOP-92人小細胞肺癌細胞

YS2902C ECC10人子宮內膜癌細胞

YS2903C COLO684人子宮腺癌細胞

YS2904C NCI-H28人惡性間皮瘤細胞

YS2905C C33A人宮頸癌細胞

YS2906C PC-9/GRPC-9GR（PC-9耐藥株）

YS2907C ECC12人子宮內膜癌細胞

YS2908C C2C12小鼠胚胎肌母小鼠胚胎肌母細胞

YS2909C c918人眼脈絡黑色瘤細胞

YS2910C HCT116/L人結腸癌耐藥株

YS2911C 5-8F鼻咽癌細胞

YS2912C K1人甲狀腺癌細胞

YS2913C Bcpap人甲狀腺癌乳頭狀細胞

YS2914C MDA-MB-231-luc人乳腺癌細胞

YS2915C hs68男性正常龜頭細胞

YS2916C NCI-H1694人小細胞肺癌

YS2917C MUTZ-3急性非淋巴白血病細胞

YS2918C U373人腦膠質瘤細胞

YS2919C 小鼠肝癌22(H22)(H22)小鼠肝癌22

YS2920C ID8ID8小鼠卵巢癌細胞

YS2921C KYSE-14人食管鱗癌細胞

YS2922C TU686TU686人喉癌細胞

YS2923C KCL-22人慢性粒白血病細胞細胞

YS2924C U343人腦膠質瘤細胞

YS2925C tpc-1人甲狀腺乳頭狀細胞

YS2926C MDBKMDBK牛腎細胞

YS2928C SNB-19人膠質瘤細胞

YS2929C SNU-368人肝癌細胞

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