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分子克隆與質(zhì)粒載體構(gòu)建

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伊萊博生物科技(上海)有限公司,公司總部位于上海長(zhǎng)江軟件園。2024年1月與上海大學(xué)醫(yī)學(xué)院成立聯(lián)合研究中心,主要以生命科學(xué)研究為基礎(chǔ),專(zhuān)注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務(wù)創(chuàng)新,建立了包含腫瘤生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等學(xué)科的研究服務(wù)體系,為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。


目前已建成并投入使用的實(shí)驗(yàn)室面積近2800平方米,包含基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)、組學(xué)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)平臺(tái),基本能夠滿足科研課題研究的全流程。


伊萊博生物擁有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)支持和實(shí)驗(yàn)操作人員團(tuán)隊(duì),核心成員來(lái)自中科院、復(fù)旦、交大、同濟(jì)等國(guó)內(nèi)重點(diǎn)高校及科研機(jī)構(gòu),能夠提供前沿的、完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)咨詢與服務(wù)。


為了響應(yīng)國(guó)家大力發(fā)展基礎(chǔ)研究的號(hào)召,推動(dòng)實(shí)驗(yàn)科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步,伊萊博生物充分利用積累多年的科研資源優(yōu)勢(shì),為廣大科研工作者提供實(shí)驗(yàn)技術(shù)培訓(xùn)服務(wù),從理論和實(shí)操兩個(gè)部分,培養(yǎng)其科研思維以及解決問(wèn)題的能力,為今后的科研工作奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。








免疫學(xué);ELISA試劑盒,抗體,生化試劑,相關(guān)試劑。原代細(xì)胞,傳代細(xì)胞,及培養(yǎng)試劑

一、實(shí)驗(yàn)原理

外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組,這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中,將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種:T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個(gè)帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能,而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒(méi)有的特性,即能使兩個(gè)平末端的雙鏈DNA分子連接起來(lái)。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低,一般可通過(guò)提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來(lái)提高平末端的連接效率。

T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步:T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復(fù)合物;然后,酶—AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上,使DNA腺苷化;后產(chǎn)生一個(gè)新的磷酸二酯鍵,把切口封起來(lái)。

DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法,為了防止載體本身的自連,可以通過(guò)(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。

連接反應(yīng)的溫度在37℃時(shí)有利于連接酶的活性.但是在這個(gè)溫度下,粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個(gè)折中溫度,即12-16℃,連接12-16h(過(guò)夜),這樣既可大限度地發(fā)揮連接酶的活性,又兼顧到短暫配對(duì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。

二、實(shí)驗(yàn)流程

目的DNA的擴(kuò)增和純化;

連接反應(yīng);

電泳檢測(cè)連接產(chǎn)物。

三、客戶提供

樣本DNA,基因序列,試劑盒。

四、公司提供

構(gòu)建好的載體,電泳膠圖,測(cè)序結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)周期:大約1-2月。





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