Annexin V-EGFP / 7-AAD雙染細胞凋亡檢測試劑盒
具體成交價以合同協(xié)議為準
- 公司名稱 上海貝博生物科技有限公司
- 品牌
- 型號
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/1/11 10:09:56
- 訪問次數(shù) 311
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保存溫度
2-8℃避光
注意事項
1.開蓋前請離心。
2.開蓋后組份按要求條件保存。
3.拆封后請盡快使用完！
2.開蓋后組份按要求條件保存。
3.拆封后請盡快使用完！
有效期
1年
檢測方法
1.流式細胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
適用樣本
1.懸浮細胞
2.貼壁細胞
2.貼壁細胞
產(chǎn)品特點
1.方便：可用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測；
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實驗；
3.準確：能準確區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數(shù)各群細胞的比例。
2.快速：1小時內(nèi)即可完成實驗；
3.準確：能準確區(qū)分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞，并計數(shù)各群細胞的比例。
產(chǎn)品應用
1.流式細胞儀
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
2.激光共聚焦
3.熒光顯微鏡
儀器準備
1.流式細胞儀或熒光顯微鏡或激光共聚焦
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.離心機
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
試劑準備
1.PBS 緩沖液（pH7.4，實驗室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
2.吸頭
3.一次性手套
4.鋁箔
使用注意事項
1.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體收集至管底，避免開蓋時液體損失導致試劑量不夠用。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標記后將細胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此在染色后立即進行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細胞。不要固定細胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
2.細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。離心力在不損失細胞的前提下盡可能小，重懸細胞是動作要輕柔，避免多次反復的激烈吹打。不用渦旋振蕩器。
3.Annexin V-FITC（等）和Propidium iodide（等）是光敏物質(zhì)，在操作時請注意避光，盡量減少它們暴露在光下的時間。有必要時可以使用帶蓋子的冰盒或鋁箔紙避光。標記后將細胞保持在避光環(huán)境中。移液過程中短暫暴露在光線下（<30秒）是可以接受的。
4.由于細胞凋亡是一個快速和動態(tài)的過程，因此在染色后立即進行分析。
5.使用Annexin V-FITC（等） 試劑盒檢測凋亡需要針對活細胞。不要固定細胞，固定操作會對結(jié)果產(chǎn)生干擾。
使用方法
樣品染色：
1. 離心收集懸浮細胞。離心機約300×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。
3. 用400 μl 1X Annexin V結(jié)合液重新懸浮細胞，濃度大約為1×106 cells/ml。
4. 在細胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-EGFP染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育2-5分鐘。 6. 立即用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。
1. 離心收集懸浮細胞。離心機約300×g力，2-8°C，離心時間5分鐘，棄培養(yǎng)基。
2. 用冷PBS洗滌細胞兩次。
3. 用400 μl 1X Annexin V結(jié)合液重新懸浮細胞，濃度大約為1×106 cells/ml。
4. 在細胞懸浮液中加入5 μl Annexin V-EGFP染色液，輕輕混勻后于2-8°C避光條件下孵育15分鐘。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后輕輕混勻于2-8°C避光條件下孵育2-5分鐘。 6. 立即用流式細胞儀或熒光顯微鏡檢測。
常見問題分析
實驗過程中Annexin V染不上色或陽性率偏低?？赡艿脑蛉缦拢?br>1. 用于檢測的流式細胞儀/顯微鏡設置不當。調(diào)整使用正確的儀器設置。
2. 確定實驗中的誘導劑是否能產(chǎn)生凋亡。可通過設定確切凋亡誘導效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細胞未啟動凋亡。重新確定誘導后凋亡啟動的時間點（時程實驗）。
4. 細胞數(shù)量偏少。增加細胞數(shù)量。
5. 貼壁細胞消化不當。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實驗過程中陽性率偏高。可能的原因如下：
1. 用于檢測的流式細胞儀/顯微鏡設置不當。調(diào)整使用正確的儀器設置。
2. 細胞本身活力太差。實驗中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導凋亡的對照細胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細胞本身活力太差。建議用臺盼藍染色計算細胞的活力，臺盼藍拒染的細胞應大于95%。若活力偏低低，建議重新復蘇細胞，通常剛復蘇的細胞至少要傳代3 次以后才能進行實驗。
2. 確定實驗中的誘導劑是否能產(chǎn)生凋亡。可通過設定確切凋亡誘導效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
3. 細胞未啟動凋亡。重新確定誘導后凋亡啟動的時間點（時程實驗）。
4. 細胞數(shù)量偏少。增加細胞數(shù)量。
5. 貼壁細胞消化不當。Annexin V 跟PS 的結(jié)合需要Ca2+離子，結(jié)合液中含有Ca2+，EDTA 的消化會影響染色，建議使用無EDTA 的，或者消化后用PBS洗滌干凈。
實驗過程中陽性率偏高。可能的原因如下：
1. 用于檢測的流式細胞儀/顯微鏡設置不當。調(diào)整使用正確的儀器設置。
2. 細胞本身活力太差。實驗中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)誘導凋亡的對照細胞經(jīng)染色后AnnexinV+/PI+雙陽性的細胞比例過高，造成這種結(jié)果的原因可能是細胞本身活力太差。建議用臺盼藍染色計算細胞的活力，臺盼藍拒染的細胞應大于95%。若活力偏低低，建議重新復蘇細胞，通常剛復蘇的細胞至少要傳代3 次以后才能進行實驗。
參考文獻
1.Hongjuan Li, et al.
Nucleus-targeted nano delivery system eradicates cancer stem cells by combined thermotherapy and hypoxia-activated chemotherapy
Biomaterials 2019 （IF=10.317）
2.Wei Bing, et al.
Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
Small 2016 （IF=11.459）
3.Linchong Sun, et al.
cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=20.507） 4.Kerong Deng, et al.
Enhanced Antitumor Efficacy by 808 nm Laser-Induced Synergistic Photothermal and Photodynamic Therapy Based on a Indocyanine-Green-Attached W18O49 Nanostructure
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
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Biomaterials 2019 （IF=10.317）
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Programmed Bacteria Death Induced by Carbon Dots with Different Surface Charge
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cMyc-mediated activation of serine biosynthesis pathway is critical for cancer progression under nutrient deprivation conditions
Cell Research 2015 （IF=20.507） 4.Kerong Deng, et al.
Enhanced Antitumor Efficacy by 808 nm Laser-Induced Synergistic Photothermal and Photodynamic Therapy Based on a Indocyanine-Green-Attached W18O49 Nanostructure
Advanced Functional Materials 2015 （IF=16.836）
5.Wenqiao Zang, et al.
miR-663 attenuates tumor growth and invasiveness by targeting eEF1A2 in pancreatic cancer
Molecular Cancer 2015 （IF=15.302）
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