CHIP

染色質(zhì)免疫沉淀(CHIP)是一種用于表觀遺傳學(xué)研究的技術(shù)，可以快速反映蛋白質(zhì)-DNA相互作用。

概念：染色質(zhì)免疫沉淀法(Chromatin Immunoprecipitation，ChIP)是一種基于抗原抗體反應(yīng)的特異性，從而起到選擇性地使DNA結(jié)合蛋白及其DNA靶標(biāo)富集的作用，是在全基因組水平研究生命體組織或細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的一種技術(shù)方法。

實(shí)驗(yàn)原理

首先在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長(zhǎng)度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后利用抗原抗體反應(yīng)的特異性，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對(duì)目的片段的純化與檢測(cè)分析，獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息，可以真實(shí)地反映體內(nèi)蛋白因子與基因組DNA結(jié)合的狀況。ChIP可用來研究某種特殊的蛋白-DNA相互作用、多種蛋白-DNA相互作用或全基因組或部分基因內(nèi)的相互作用。

實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞固定

甲醛交聯(lián)

染色質(zhì)斷裂

超聲

免疫沉淀蛋白

和DNA復(fù)合物

用Protein-A/G Sephrose回收免疫沉淀

沉淀收集，洗滌，

解交聯(lián)

蛋白酶K/NaCl處理，接觸交聯(lián)

DNA純化

鑒定