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化工儀器網(wǎng)>產(chǎn)品展廳>試劑標物>常用實驗試劑>普通試劑>邁??蒑RC-C23009-50T Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

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成都邁??缮锸且患页闪⒂?017年的生物科技公司,主要團隊成員均擁有超過20年的實驗外包經(jīng)驗。是靠譜的實驗外包技術(shù)服務(wù)廠家。

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技術(shù)服務(wù),科研試劑

供貨周期 兩周 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè),綜合
微信: MiracleBusiness 名稱: 成都邁??缮顲ell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

成都邁睿可生物科技有限公司出品

Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

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Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)使用說明

【產(chǎn)品基本信息】

產(chǎn)品名稱:Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒) 產(chǎn)品貨號:MRC-C23009-500T

【包裝清單】

成分

數(shù)量

CCK-8溶液

5ml

說明書

1份

【產(chǎn)品描述】

Cell Counting Kit-8,簡稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8開發(fā)的應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑盒。

WST-8在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖1)。細胞增殖越多越快,則顏色越深;細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

WST-8被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan為水溶性,無需額外增加溶解步驟,使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。同時,培養(yǎng)基中的酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

圖1. WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent,即電子耦合試劑)

【產(chǎn)品使用說明】

1.通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要,進行培養(yǎng)并給予藥物刺激。

推薦操作:通常建議培養(yǎng)板邊孔不用于實驗,僅加入100μL的培養(yǎng)基以減少培養(yǎng)過程中蒸發(fā)的影響

2.每孔加入10微升增強型CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升,則需加入20微升增強型CCK-8溶液,其它情況以此類推??梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細胞培養(yǎng)液和增強型CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測,需設(shè)置加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液、藥物和增強型CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

推薦操作:檢測前,用新鮮的培養(yǎng)基或不含血清的培養(yǎng)將CCK-8按1:10(CCK-8試劑:培養(yǎng)基)稀釋,混勻配成CCK-8工作液。然后吸去培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)上清,加入稀釋好的CCK-8工作液,100μL/孔。此操作可減少重復(fù)樣本間的誤差。

3.在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時,對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測,然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

4.在450nm測定吸光度??梢允褂么笥?00nm的波長,例如650nm,作為參考波長進行雙波長測定。

【保存條件】

4oC避光保存一年有效,-20oC避光保存兩年有效。

【注意事項】

1.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng),所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測,如果待檢測體系中存在較多的還原劑,需設(shè)法去除。

2.用酶標儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡,否則會干擾測定。

3.為了避免CCK-8溶液可能帶來的對于后續(xù)檢測的影響,除非該細胞極難獲得,否則不推薦把CCK-8溶液孵育過的細胞用于其它實驗。

4.如果吸光度值太低,可適當增加細胞數(shù)量或延長加入CCK-8溶液后的孵育時間。

5.部分金屬對CCK-8的顯色有影響,如:氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅均會降低CCK-8試劑的靈敏度。

6.CCK-8孵育結(jié)束后如果不能及時檢測,可將培養(yǎng)板放入4℃冰箱,或加入10μL 0.1M Hcl或加入10μL 1% SDS溶液終止反應(yīng)。

7.試劑使用過程中要避免帶入細菌污染。

8本產(chǎn)品僅用于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。

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Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒




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