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Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

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Cell Counting Kit8(CCK8)試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒)使用說明

【產(chǎn)品基本信息】

產(chǎn)品名稱：Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒) 產(chǎn)品貨號：MRC-C23009-500T

【包裝清單】

【產(chǎn)品描述】

Cell Counting Kit-8，簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8開發(fā)的應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑盒。

WST-8在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的 formazan (參考圖1)。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

WST-8被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan為水溶性，無需額外增加溶解步驟，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。同時，培養(yǎng)基中的酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

圖1. WST-8檢測原理圖 (EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑)

【產(chǎn)品使用說明】

1.通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小、細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要，進行培養(yǎng)并給予藥物刺激。

推薦操作：通常建議培養(yǎng)板邊孔不用于實驗，僅加入100μL的培養(yǎng)基以減少培養(yǎng)過程中蒸發(fā)的影響

2.每孔加入10微升增強型CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升增強型CCK-8溶液，其它情況以此類推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細胞培養(yǎng)液和增強型CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。如果擔心所使用的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細胞培養(yǎng)液、藥物和增強型CCK-8溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。

推薦操作：檢測前，用新鮮的培養(yǎng)基或不含血清的培養(yǎng)將CCK-8按1:10（CCK-8試劑：培養(yǎng)基）稀釋，混勻配成CCK-8工作液。然后吸去培養(yǎng)孔中的培養(yǎng)上清，加入稀釋好的CCK-8工作液，100μL/孔。此操作可減少重復(fù)樣本間的誤差。

3.在細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

4.在450nm測定吸光度?？梢允褂么笥?00nm的波長，例如650nm，作為參考波長進行雙波長測定。

【保存條件】

4oC避光保存一年有效，-20oC避光保存兩年有效。

【注意事項】

1.本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑(例如一些抗氧化劑)會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。

2.用酶標儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。

3.為了避免CCK-8溶液可能帶來的對于后續(xù)檢測的影響，除非該細胞極難獲得，否則不推薦把CCK-8溶液孵育過的細胞用于其它實驗。

4.如果吸光度值太低，可適當增加細胞數(shù)量或延長加入CCK-8溶液后的孵育時間。

5.部分金屬對CCK-8的顯色有影響，如：氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅均會降低CCK-8試劑的靈敏度。

6.CCK-8孵育結(jié)束后如果不能及時檢測，可將培養(yǎng)板放入4℃冰箱，或加入10μL 0.1M Hcl或加入10μL 1% SDS溶液終止反應(yīng)。

7.試劑使用過程中要避免帶入細菌污染。

8本產(chǎn)品僅用于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

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