14614ES 超潔凈高穩(wěn)定性逆轉(zhuǎn)錄酶含甘油
參考價 | ¥1119.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號14614ES
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2025/3/10 8:55:53
- 訪問次數(shù) 7
10 KU | 1119.00元 | 99 件可售 |
聯(lián)系方式:曹女士400-6111-883 查看聯(lián)系方式
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
---|
產(chǎn)品簡介
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基礎(chǔ)上通過基因工程技術(shù)得到的全新逆轉(zhuǎn)錄酶,與Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其速度和穩(wěn)定性大幅度提高。此外,該產(chǎn)品經(jīng)過翌圣生物特別研發(fā)的精制工藝處理,產(chǎn)品中核酸酶、宿主gDNA以及其他背景菌gDNA殘留極低,適用于快速全預(yù)混RT-qPCR試劑開發(fā)。
產(chǎn)品信息
貨號 | 14614ES92 / 14614ES97 / 14614ES98 |
規(guī)格 | 10 KU / 100 KU / 200 KU |
單位定義 | 以Poly(A) .Oligo(dT)為模板-引物,在37℃,10 min內(nèi),將1 nmol的dTTP摻入為酸不溶性物質(zhì)所需要的酶量定義為1個活性單位(U)。 |
組分信息
組分名稱 | 14614ES92 | 14614ES97 | 14614ES98 |
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 50 μL | 500 μL | 1 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存,有效期1年。
使用說明
1.兩步法RT-PCR/qPCR(第一鏈cDNA合成)
1)RNA變性(此步為可選步驟,RNA變性有助于打開二級結(jié)構(gòu),可在很大程度上提高第一鏈cDNA的產(chǎn)量。)
組分 | 使用量 |
RNase free ddH2O | to 13 μL |
Oligo (dT)18 (50 μM) or Random Primers (50 μM) or Gene Specific Primers (2 μM) | 1 μL or 1 μL or 1 μL |
模板RNA | Total RNA: 1 ng -5 μg或mRNA: 1-500 ng |
65℃加熱5 min,迅速置于冰上冷卻2 min。簡短離心收集反應(yīng)液后,加入下表中的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液,并輕輕吹打混勻。
2)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制(20 μL體系)
組分 | 使用量 |
上一步的反應(yīng)液 | 13 μL |
5×RT Buffer | 4 μL |
dNTP Mix (10 mM) | 1 μL |
Hifair UCF. ME® Advanced Reverse Transcriptase (200 U/μL) | 200 U |
RNase inhibitor (40 U/µL) | 1 μL |
RNase free ddH2O | To 20 μL |
3)逆轉(zhuǎn)錄程序設(shè)置
溫度 | 時間 |
25℃* | 5 min |
42℃** | 15-30 min |
85℃*** | 5 min |
*當使用Random Primers時,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。
**逆轉(zhuǎn)錄溫度:推薦使用42℃。對于高GC含量模板或者復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的模板,可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-60℃。
***85℃加熱5 min,目的是使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。
4)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可立即用于后續(xù)PCR或qPCR反應(yīng),也可-20℃短期保存,若需長期保存,建議分裝后,于-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
2.一步法RT-PCR/qPCR
該逆轉(zhuǎn)錄酶適用于一步法RT-PCR/qPCR,推薦每25 μL反應(yīng)體系,添加10-40 U逆轉(zhuǎn)錄酶,最適逆轉(zhuǎn)錄條件為50℃ 15min,也可根據(jù)實際情況逐步增加逆轉(zhuǎn)錄酶用量,多重體系建議提高酶量。
注意事項
1. 請保持實驗區(qū)域潔凈;操作時需穿戴干凈的手套、口罩;實驗所用耗材均需保證RNase free,以防止RNase污染。
2. 所有操作均應(yīng)在冰上進行,防止RNA降解。
3. 為保證高效率逆轉(zhuǎn)錄,建議使用高質(zhì)量的RNA樣本。
4. 本產(chǎn)品僅用作科研用途。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。