諾博萊德 DAB法顯色試劑盒 顯色與信號檢測

NobleRyder  SW9828  DAB法顯色試劑盒（小鼠/兔IgG）,Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產(chǎn)品貨號：SW9828

產(chǎn)品名稱：DAB法顯色試劑盒（小鼠/兔IgG）,Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

產(chǎn)品規(guī)格：1盒

產(chǎn)品簡介：

英文名稱：Western Blotting Mouse/Rabbit IgG DAB Chromogenic Reagent Kit

中文名稱：DAB法顯色試劑盒（小鼠/兔IgG）

規(guī)格：1盒

儲存條件：-20℃，avoid light，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

保存：

-20℃避光密閉保存，一年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和 20 倍 DAB 顯色液B 存放于 2-8℃以方便使用。

產(chǎn)品簡介：

SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后， 固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免 疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。

操作步驟：(僅供參考)

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:

1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標(biāo)記，一般在左上角剪一缺口。室溫用 TBS-T 漂洗 3 次每次 5min, 以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的 SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。

2) 按 5g 封閉試劑加 100ml 雙蒸水計，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過的轉(zhuǎn)印膜，封閉液內(nèi)，搖床震動，室溫封閉 30min。用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。

3) 將 10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成 1×（10ml 10×抗體稀釋液加入 90ml 雙蒸水，混勻，可 4℃ 保存三個月）。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用 1×的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量以及一抗的推薦稀釋濃度來稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育過夜或 37℃搖動孵育 2h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。

注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標(biāo)記，分開孵育。

5) 用 TBS-T，PH7.6 洗液，室溫漂洗 3 次每次 5min。

6) 用稀釋好的抗體稀釋液稀釋抗體。根據(jù)用量，按 10ml 抗體稀釋液加入 1-2ul HRP 標(biāo)記二抗的比例， 配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃搖動孵育 1h。此用過的抗體一般可回收第二天再使用一次。

7) 用 TBS-T ，PH7.6 洗液，室溫漂洗3次每次 10min。

8) 配制 DAB 顯色：根據(jù)用量，取 TBS-T 4ml，加入 DAB 顯色液 A、DAB 顯色液 B 各 200ul，混勻，加 在膜正面，室溫下顯色。在目標(biāo)條帶顯出后，而且背景未出時，放入水中終止顯色。

注意事項：

1. 請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒。

2. western blotting DAB 顯色法操作簡單，但其敏感性與 ECL 發(fā)光發(fā)有一定的差距，一般只適用于豐度較高的蛋白。

3. 可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實驗反應(yīng)時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長最終漂洗次數(shù)與時間。如果條帶過弱，可延長抗體孵育時間。

4. 如果wan全沒有條帶，請檢查前期蛋白處理及實驗過程， 如果確認無誤，反復(fù)兩次依舊無結(jié)果， 請換用 ECL 發(fā)光法顯色。

5. TBS-T（0.01M）配制方法：稱取 NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用 800ml 的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào) PH 到 7.6，再加入 0.5ml Tween－20，用雙蒸水 加至 1000ml，混勻即可。（也可按照自己的配制習(xí)慣來配制）

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